D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7

产品货期

现货

产品优势

水溶性和稳定性好

适用范围

用于萤光素酶基因检测、活体成像以及ATP定量检测

产品介绍

萤光素是最常用且用途最广泛的生物发光底物。萤火虫（Photinus pyralis）及多种其他甲虫体内存在萤火虫萤光素酶/萤光素生物发光体系。萤光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP激活的萤光素。萤火虫萤光素酶通过ATP依赖性氧化反应产生560 nm波长的化学发光，该发光信号在数秒内达到峰值——当萤光素和ATP过量时，光输出强度与萤光素酶活性成正比。

萤光素酶长期被偶联至抗体，作为免疫检测中的标记物，并以萤光素作为检测底物。与辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶相比，萤光素酶对化学修饰的耐受性较低。该酶的一个显著优势是哺乳动物组织中内源性萤光素酶活性极低，且具有高检测灵敏度。

另一重要应用领域是卫生监测。萤光素酶/萤光素体系可通过检测ATP来指示污染情况，因为所有生物体中存在的ATP是产生发光的必要条件。此类ATP生物发光技术主要应用于食品加工厂的表面检测，通过质量保证程序判断设备或产品是否存在污染。

注意事项

1.一般活体用DPBS，避免渗透压影响。体外细胞一般用无菌水，避免盐粒子影响信号通路级联反应，尤其是钙信号。

2.该产品用DPBS溶解后，如果需要保存，请调整如下浓度及pH保存：100 mM, pH ~6.5, -20℃避光。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。 如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。

3.Luc的Ex/Em及其他相关内容链接：Spectral properties of luciferin and EGFP. A: Normalized excitation and... | Download Scientific Diagram (researchgate.net)

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

用于体外生物发光图像测定的实施方案

1在无菌水中制备100mM（100-200X）荧光素原液。混合均匀。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

2.在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

3.从培养细胞中分离培养基。

4.将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

用于体内生物发光图像测定的实施方案

1.在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液，不含Mg²⁺和Ca²⁺。 混合均匀。

2.过滤器通过0.2μm过滤器过滤溶液。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

3.在动物体重150mg / kg（或10μL/ g荧光素储备溶液）成像前10-15分钟腹膜内（i.p.）注射荧光素。

注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。

荧光素报告分析分子测定的实施方案

1.在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

2.制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液，pH7.8。

3.将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

4.根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液对光度计进行预调。

5.注入200μl荧光素工作溶液，无延迟，10秒积分时间。

注：积分时间（integration time）是指在光学测量中，仪器收集光信号并累积的时间长度。这个时间越长，仪器能够收集到的光信号就越多，从而提高测量的灵敏度和准确性。在荧光素实验中，10秒的积分时间意味着仪器在这10秒内不断收集并累积光信号，然后将其用于分析。

试剂应用文献