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D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7

英文名称:D-Luciferin, sodium salt *CAS#: 103404-75-7*
产品参数
Ex (nm)385Em (nm)529
分子量302.3溶剂Water
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

D-荧光素是流行和多功能的生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫(Photinus pyralis)和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP活化的荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值,当荧光素和ATP过量存在时,光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合,并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外,在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为存在于所有生物体中的ATP需要产生发光。这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量,以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。

注:一般活体用DPBS,避免渗透压影响。体外细胞一般用无菌水,避免盐粒子影响信号通路级联反应,尤其是钙信号。

注:该产品用DPBS溶解后,如果需要保存,请调整如下浓度及pH保存:100 mM, pH ~6.5, -20℃避光。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。 如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。

Luc的Ex/Em及其他相关内容链接:Spectral properties of luciferin and EGFP. A: Normalized excitation and... | Download Scientific Diagram (researchgate.net)

D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

百萤问号:荧光素酶到底该如何检测?

实验方案

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液。混合均匀。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

 

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2过滤器通过0.2μm过滤器过滤溶液。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像前10-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素。

注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。

 

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

3.4根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液对光度计进行预调。

3.5注入200μl荧光素工作溶液,无延迟,10秒积分时间。

注:积分时间(integration time)是指在光学测量中,仪器收集光信号并累积的时间长度。这个时间越长,仪器能够收集到的光信号就越多,从而提高测量的灵敏度和准确性。在荧光素实验中,10秒的积分时间意味着仪器在这10秒内不断收集并累积光信号,然后将其用于分析。

 

注意1:D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备,并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2:D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3:如果检测ATP,请戴上手套并使用无ATP容器,尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压水进行所有试剂制备。

 

试剂应用文献

EPHB4 Regulates the Proliferation and Metastasis of Oral Squamous Cell Carcinoma through the HMGB1/NF-$\kappa$B Signalling Pathway
Authors: Yi, Chen and Zhang, Xiliu and Li, Hongyu and Chen, Guanhui and Zeng, Binghui and Li, Yiming and Wang, Chao and He, Yi and Chen, Xun and Huang, Zixian and others,
Journal: Journal of Cancer (2021): 5999--6011
 
Untersuchung der Auswirkungen von MYC-{\"U}berexpression in h{\"a}matopoetischen Zellen auf die Knochenmark-Mikroumgebung in einem murinen AML-Modell
Authors: Franke, Katharina
Journal: (2017)
 
Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Pichler, Martin and Stiegelbauer, Verena and Vychytilova-Faltejskova, Petra and Ivan, Cristina and Ling, Hui and Winter, Elke and Zhang, Xinna and Goblirsch, Matthew and Wulf-Goldenberg, Annika and Ohtsuka, Masahisa and others, undefined
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres--0497
 
C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li, Li-Li and Wang, He-Rong and Zhou, Zhi-Yi and Luo, Jing and Wang, Xiao-Li and Xiao, Xiang-Qian and Zhou, Yu-Bai and Zeng, Yi
Journal: PloS one (2016): e0149748
 
Identification of a novel protein kinase a inhibitor by bioluminescence-based screening
Authors: Ishimoto, Tetsuya and Azechi, Kenji and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969--1974
 
Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Ishimoto, Tetsuya and Azechi, Kenji and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969--1974
 
Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Mano, Hiroki and Ishimoto, Tetsuya and Okada, Takuya and Toyooka, Naoki and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689--1693

 

参考文献

Mutagenesis of solvent-exposed amino acids in Photinus pyralis luciferase improves thermostability and pH-tolerance
Authors: Law GH, G and elman OA, Tisi LC, Lowe CR, Murray JA.
Journal: Biochem J (2006): 305
 
Determination of p-glycoprotein ATPase activity using luciferase
Authors: Matsunaga T, Kose E, Yasuda S, Ise H, Ikeda U, Ohmori S.
Journal: Biol Pharm Bull (2006): 560
 
Expression of firefly luciferase in Candida albicans and its use in the selection of stable transformants
Authors: Doyle TC, Nawotka KA, Purchio AF, Akin AR, Francis KP, Contag PR.
Journal: Microb Pathog (2006): 69
 
PET imaging and optical imaging with D-luciferin [11C]methyl ester and D-luciferin [11C]methyl ether of luciferase gene expression in tumor xenografts of living mice
Authors: Wang JQ, Pollok KE, Cai S, Stantz KM, Hutchins GD, Zheng QH.
Journal: Bioorg Med Chem Lett (2006): 331
 
Bioluminescence of monolayers of firefly luciferase immobilized on graphite
Authors: Palomba S, Berovic N, Palmer RE.
Journal: Langmuir (2006): 5451
 
Bovine serum albumin displays luciferase-like activity in presence of luciferyl adenylate: insights on the origin of protoluciferase activity and bioluminescence colours
Authors: Viviani VR, Ohmiya Y.
Journal: Luminescence (2006): 262
 
Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect
Authors: Szentirmai O, Baker CH, Lin N, Szucs S, Takahashi M, Kiryu S, Kung AL, Mulligan RC, Carter BS.
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Two different domains of the luciferase gene in the heterotrophic dinoflagellate Noctiluca scintillans occur as two separate genes in photosynthetic species
Authors: Liu L, Hastings JW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A. (2006)
 
Effect of different salts and detergents on luciferin-luciferase luminescence of the enchytraeid Fridericia heliota
Authors: Rodionova NS, Petushkov VN.
Journal: J Photochem Photobiol B (2006): 123
 
Evaluation of firefly luciferase bioluminescence mediated photodynamic toxicity in cancer cells
Authors: Schipper ML, Patel MR, Gambhir SS.
Journal: Mol Imaging Biol (2006): 218

 

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产品名称 货号
D-荧光素钾盐 CAS 115144-35-9 Cat#12505