膜电位荧光探针DiBAC4(3) CAS 70363-83-6

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产品优势  

电位依赖性分布：探针的跨膜分布随膜电位变化而改变，并伴随荧光强度变化。

响应速度较慢（秒至分钟级），适合监测非兴奋性细胞的缓慢膜电位波动。

信号幅度大，灵敏度高（荧光变化显著，远高于快响应探针的1%/mV）。

适用范围

用于监测细胞膜电位的慢响应探针

产品介绍

DiBAC4(3)是一种高灵敏度的慢响应膜电位探针。这类慢响应探针通过膜电位依赖性的跨膜分布变化来产生荧光信号改变，其光学响应幅度显著大于快响应探针（通常快响应探针仅产生每mV1%的荧光变化）。这类慢响应探针（包括阳离子型碳菁染料、罗丹明类染料等）特别适用于检测由呼吸活动，离子通道通透性，药物结合和其他因素引起的非兴奋性细胞的平均膜电位变化。

操作步骤

1.准备细胞

1.1贴壁细胞

使用生长培养基将细胞铺板过夜，96孔板：40,000~80,000个细胞/孔/100 µL ；384孔板：10,000~20,000个细胞/孔/25 µL 

1.2悬浮细胞

从培养基中离心收集细胞，用等体积的HHBS缓冲液和MP染料加载液重悬细胞（见步骤2.2）。96孔聚-D赖氨酸板：125,000~250,000个细胞/孔/100 µL；384孔聚-D赖氨酸板：30,000~60,000个细胞/孔/25 µL

实验前将板以800 rpm的速度离心2分钟，并关闭制动器。

2.DiSBAC2（3）染料工作液：

2.1使用高纯度无水DMSO配制10~30 mM DiSBAC2(3)储备液，现配现用，剩余储备液需分装后<-20°C避光保存。

注意：避免反复冻融。

2.2将DiSBAC2(3)固体溶于DMSO或解冻储备液至室温。使用Hanks缓冲液（含20mM Hepes，HHBS）或自选缓冲液（pH7.0）配制20-40μM的2倍工作液，其中需添加0.04%-0.08% Pluronic® F-127（货号20053）和2mM Trypan Red Plus™（货号2456）。涡旋振荡混匀，该工作液在室温下至少可稳定保存2小时。

3.膜电位检测实验操作

3.1向细胞板中加入DiSBAC2(3)染料工作液（步骤2.2配制）：96孔板：100μL/孔；384孔板：25μL/孔

注意：1.若待测化合物会与培养基或血清成分发生干扰，需先使用等体积HHBS缓冲液替换原培养基，再加染料工作液。也可采用无血清培养条件。

          2.染料加载后切勿洗涤细胞。

3.2将染料加载后的细胞板置于培养箱中孵育30-60分钟。

注意：在某些情况下，在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.3使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4在激发/发射波长=540/590nm（货号21414）下监测荧光强度进行膜电位检测。

注意：实验前必须进行信号测试。不同仪器的信号强度范围不同，需将测试信号强度调整至仪器最大量程的10%-15%。例如：FLIPR-384仪器的最大荧光强度值为65,000时，应将仪器参数调整为测试信号强度在7,000-10,000范围内

试剂应用文献