活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐] CAS 596-09-8

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产品优势

通过颜色对比显著提高了细胞活性检测的可靠性

适用范围

用于细胞示踪

产品介绍

FDA（荧光素二乙酸酯）是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，能够自由穿透细胞膜。进入细胞后，胞内酯酶会水解其二乙酸基团，生成具有强荧光的荧光素分子。这些荧光素分子会在膜结构完整的活细胞内累积，因此其绿色荧光可作为细胞活力的标记。而膜结构受损或代谢异常的细胞则无法累积荧光产物，因此不会显现绿色荧光。

FDA可与碘化丙啶（PI）染色联合使用：非活性细胞会摄取PI呈现红色荧光，而活细胞因不摄取PI仅显示绿色荧光。这种双色标记法能更准确地区分活细胞与非活性细胞，相比单色分析法可提供更精确的细胞活性定量结果。该方法的优势在于通过颜色对比显著提高了细胞活性检测的可靠性。

操作步骤

本方案为通用指导，需根据具体实验需求调整

1.准备2-10 mM DMSO储备溶液

• 产品#22014：向50 μg试剂瓶中加入45 μL DMSO，配制成2 mM储备液（1 mg/mL≈1.8 mM）

• 产品#22015：向50 μg试剂瓶中加入36 μL DMSO，配制成2 mM储备液（1 mg/mL≈1.46 mM）

• 产品#22016：加入153 μL DMSO配制成10 mM储备液（1 mg/mL≈1.53 mM）

• 产品#22017：加入215 μL DMSO配制成10 mM储备液（1 mg/mL≈2.15 mM）

• 产品#22020：将4.2 mg试剂溶于1 mL DMSO配制成10 mM储备液（1 mg/mL≈2.4 mM）

注意：储备液需现配现用，剩余溶液应分装避光保存于<-20°C，避免反复冻融。

2.配制工作液

使用前将储备液用HHBS缓冲液（含20 mM Hepes，pH 7.0）或自选缓冲液稀释至1-20 μM，涡旋混匀。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞所需的时间。

3.2离心细胞，每管得到2-10 x10⁵细胞。

3.3用500 μL工作液重悬细胞（来自步骤2）。

3.4将细胞与染料溶液在室温或37° C下避光放置15至30分钟。

3.5从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到2-10 x 10 ⁵个细胞。

3.6用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光变化。

细菌细胞染色：

推荐将储备液以1:800比例稀释于经测试菌预培养的营养肉汤中（新鲜肉汤或PBS也可用）。菌悬液需用PBS稀释至10⁵-10⁷个/mL，染色方法：将1 mL菌液过0.45 μm滤膜（25mm）后真空抽滤，加入1 mL染料工作液，室温避光孵育5-10分钟，即可对细菌染色。