钙离子荧光探针Fluo5N,AM

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产品优势  

1.低背景荧光：Fluo-5与Ca²⁺结合后会显著增强荧光信号，因此能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适用范围广：用于共聚焦显微镜、流式细胞术和微孔板筛选等应用。

3.单波长检测：荧光强度随Ca²⁺浓度升高而增强，

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Fluo-5N是一种低钙结合亲和力（Kd≈90 μM）的Fluo-4类似物，适用于检测1 μM至1 mM范围内的细胞内钙浓度——该浓度会使Fluo-4的信号达到饱和。Fluo-5N AM酯可通过直接加入溶解好的染料到细胞培养皿中实现活细胞负载。其兼容氩离子激光器的488 nm激发光，这使得Fluo-5N可广泛应用于共聚焦显微镜、流式细胞术及微孔板筛选检测。该染料的激发和发射波长分别为494 nm与516 nm，当结合钙离子时，其荧光强度可增强100倍以上。

操作步骤

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备溶液均应分装成单次使用量，配制后保存于-20°C环境中，并避免反复冻融。

Fluo-5N AM储备液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Fluo-5N AM储备液

工作液配制

Fluo-5N AM工作液

实验当天，将Fluo-5N AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）配制2-20 µM的Fluo-5N AM工作液，并添加0.04% Pluronic® F-127。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体负载浓度需根据实验条件优化。

注：非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fluo-5N AM的水溶性，其多种规格溶液可从AAT Bioquest公司购买。
注：若细胞存在有机阴离子转运体，建议在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少脱酯化染料的泄漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶型、钠盐及稳定化溶液。

标准实验步骤

以下为活细胞负载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.将细胞于生长培养基中培养过夜；

2.次日向细胞板中加入1X Fluo-5N AM工作液；

注：若待测化合物与血清存在干扰，负载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将负载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育30至60分钟；

注：部分细胞系延长孵育时间至2小时以上可增强信号强度。

4.更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）去除多余探针；

5.加入刺激剂后立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜，或FDSS、FLIPR、FlexStation等可编程液体处理系统的荧光酶标仪（检测波长490/525 nm，截止波长515 nm）检测荧光信号