钙离子荧光探针Fura2AM CAS 108964-32-5

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现货

产品优势  

相较于Fluo-4等单波长钙探针，能有效减少染料负载量差异、细胞渗漏及光漂白等因素的干扰。

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Fura-2 AM是一种细胞膜渗透型比率法钙离子荧光探针，在紫外光激发下会发出绿色荧光。

Fura-2 AM是Fura-2的脂溶性衍生物。作为比率法钙指示剂家族成员，该家族还包含Indo-1等荧光染料。这类探针通过检测钙离子螯合时荧光团两个波长的变化并计算其比值来定量钙浓度。这与Fluo-4等强度法探针形成对比——后者仅采用单一光谱数值进行测量。

当与钙离子结合时，Fura-2在300-400 nm波长范围内会出现吸收峰位移：未结合钙离子时最大激发波长为340 nm，结合钙离子后最大激发波长变为380 nm。通过扫描激发光谱（发射波长固定为510 nm）可检测这种吸光度变化。计算得到的340/380 nm比值与细胞内钙离子浓度成正比。

操作步骤

储备液配制

所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。

Fura-2 AM储备液

使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-2 AM储备液。

工作液配制

Fura-2 AM工作液

实验当天，将Fura-2 AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura-2 AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura-2 AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

标准实验流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板加入1X Fura-2 AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

5.加入刺激剂后，立即使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或者集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在Ex/Em₁ = 340/510 nm截止475 nm和Ex/Em₂ = 380/510 nm截止475 nm检测荧光

试剂应用文献