钙离子荧光探针Fura8FF , AM
| Ex (nm) | 354 | Em (nm) | 524 |
| 分子量 | 973.86 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
相较于单波长钙探针，能有效减少染料负载量差异、细胞渗漏及光漂白等因素的干扰。
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
细胞通透性Fura-8FF AM是Fura-8 AM的类似物，其钙离子结合亲和力显著降低（Kd≈10μM）。该探针的发射波长红移至可见光长波段，与常规滤光片系统兼容。相较于Fura-2FF AM，Fura-8FF™ AM对钙离子具有更高的检测灵敏度，并能提供更优的信背比。具体应用时，可通过监测530nm处的发射光强度，分别计算354nm和415nm激发波长下的荧光强度比值。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | Fura 2滤波片组 |
| Em： | Fura 2滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 355,415 nm |
| Em： | 530 nm |
| Cutoff： | 475nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式/可分液处理 |
溶解方案(溶剂以说明书为准)
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 102.684 µL | 513.421 µL | 1.027 mL | 5.134 mL | 10.268 mL |
| 5 mM | 20.537 µL | 102.684 µL | 205.368 µL | 1.027 mL | 2.054 mL |
| 10 mM | 10.268 µL | 51.342 µL | 102.684 µL | 513.421 µL | 1.027 mL |
操作步骤
储备液配制
所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。
Fura-8FF AM储备液
使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-8FF AM储备液。
工作液配制
Fura-8FF AM工作液
实验当天，将Fura-8FF AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。
选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura-8FF AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。
注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura-8FF AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。
标准实验流程
以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：
1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.次日向细胞板加入1X Fura-8FF AM工作液。
注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。
3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。
注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。
4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。
5.加入刺激剂后，立即使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或者集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在Ex/Em1 = 355/530 nm cutoff 475 nm 和Ex/Em2 = 415/530 nm cutoff 475 nm.检测荧光
