钙离子荧光探针Fura-FF, AM CAS 348079-12-9

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产品优势  

相较于单波长钙探针，能有效减少染料负载量差异、细胞渗漏及光漂白等因素的干扰。

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

在比率型钙离子荧光探针中，Fura-2和Indo-1是最常用的两种。Fura-2属于激发波长比率型探针，而Indo-1属于发射波长比率探针。在比率成像显微镜应用中，由于改变激发波长比改变发射波长更具可操作性，因此Fura-2更受青睐。当与Ca²⁺结合时，Fura-2在300-400 nm激发光谱范围内会出现吸收峰位移（发射光监测波长约510 nm）。

Fura-2FF AM是其细胞膜通透性衍生物，作为Fura-2 AM的类似物，其钙离子结合亲和力显著降低（Kd值约10 µM）。该AM酯形式可通过非侵入方式有效负载至活细胞内。

操作步骤

储备液配制

所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。

Fura-FF AM储备液

使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-FF AM储备液。

工作液配制

Fura-FF AM工作液

实验当天，将Fura-FF AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura-FF AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura-FF AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

标准实验流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板加入1X Fura-FF AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

5.加入刺激剂后，立即使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或者集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在Ex/Em₁ = 340/510 nm截止475 nm和Ex/Em₂ = 380/510 nm截止475 nm检测荧光

试剂应用文献

An Orai1 gain-of-function tubular aggregate myopathy mouse model phenocopies key features of the human disease
Authors: Zhao, Nan and Michelucci, Antonio and Pietrangelo, Laura and Malik, Sundeep and Groom, Linda and Leigh, Jennifer and O’Connor, Thomas N and Takano, Takahiro and Kingsley, Paul D and Palis, James and others,
Journal: The EMBO Journal (2024): 1--31