钙离子荧光探针Fura Red,AM *CAS 149732-62-7*

Fura Red 是一种可见光激发的 fura-2 类似物，与单激发绿色荧光钙指示剂一起使用时，通过显微光度法、成像或流式细胞术对单细胞中的钙离子进行比例测量提供了独特的可能性。 Fura Red AM 是 Fura Red 的细胞渗透版本，用于无创细胞内装载。 Fura Red AM 可以与 Fluo-3 AM、Fluo-8 AM 或 Cal-520 AM 同时加载到细胞中。组合两种钙染料的优点是可以使用具有更长激发波长的染料。与使用紫外光或近紫外光（例如 Fura-2）激发的比率染料相比，这通常对细胞造成的伤害较小，因为可见波长的光的光毒性较小。

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实验方案

储备溶液配制

在高质量无水DMSO制备2至5 mM 的Fura Red AM中储备溶液。

工作溶液配制

Fura Red AM工作溶液
1.在实验当天，将Fura Red AM溶解在DMSO中，或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在含有0.04%Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20µM Fura Red AM工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用最终浓度为4-5μM的Fura Red AM。细胞负载所需指示剂的确切浓度请根据经验确定。

注：非离子洗涤剂Pluronic F-127用于提高Fura Red AM的水溶性。可从百萤购买各种Pluronic F-127溶液。
注：如果你的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（1-2mM）添加到染料工作溶液中（最终井内浓度为0.5-1mM），以减少酯化指示剂的泄漏。多种形式的丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将1X Fura Red AM工作溶液添加到孔板中。
注意：如果你的化合物干扰血清，在染色前用新鲜的HHBS缓冲液代替生长培养基。
3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。
注：将染料培养2小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激物，并同时使用配备有FITC滤波片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如FDSS、FLIPR或FlexStation）的荧光酶标仪在490/525nm，Cutoff=515nm处检测荧光强度。

试剂应用文献

参考文献