Live or Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光

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产品优势

检测快速：在黑色微孔板中完成染色与定量仅需不到2小时

结果精准：相较于其他活性检测方法稳定性和准确性好

平台兼容：适用于各类荧光检测平台，包括微孔板分析、免疫细胞化学和流式细胞术

广谱适用：适用于增殖与非增殖细胞，悬浮与贴壁细胞均可检测

 

产品介绍

Live or Dead™细胞活性检测试剂盒采用两种荧光指示剂：钙黄绿素AM标记活细胞，细胞非渗透性DNA结合染料标记膜受损细胞。疏水性的钙黄绿素AM可穿透活细胞膜，经胞内酯酶水解后生成强荧光亲水性钙黄绿素，其荧光强度与活细胞数量成正比；而极性DNA染料无法穿透完整细胞膜，仅在与死细胞DNA结合时发荧光。

本检测方法在黑色微孔板中可在两小时内完成染色与定量，较其他活性检测方法更稳定准确。该技术兼容多种荧光检测平台，包括微孔板分析、免疫细胞化学和流式细胞术等高通量检测系统，适用于增殖/非增殖细胞、悬浮/贴壁细胞等多种细胞类型。

Live or Dead 细胞活性检测试剂盒提供全部必需组分及优化检测方案。按96孔板每孔100μl试剂消耗，可完成100次检测；按384孔板每孔25μl试剂消耗，则可实现400次检测。

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流式细胞仪
Ex:	488 nm
Em：	530/30 nm、610/20 nm
通道:	FITC, PE-Texas Red 通道

 

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荧光显微镜
Ex:	FITC滤波片组（活），TRITC滤波片组（死）
Em：	FITC滤波片组（活），TRITC滤波片组（死）
推荐孔板:	黑色透明底板

 

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荧光酶标仪
Ex:	490 nm (活), 540 nm (死)
Em：	525 nm (活), 620 nm (死)
Cutoff：	515 nm, 590 nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.加入相同体积的CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温或37°C孵育1小时
4.在强度下监测荧光（底部读取模式）Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）和540 / 620nm（截止= 590nm），带有FITC滤光片（细胞存活）的荧光显微镜和TRITC滤光片 （细胞死亡），或FL1和FL2通道的流式细胞仪。

 

溶液配制

1.储存溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

CytoCalcein 绿色原液：

将20μLDMSO（组分C）加入到CytoCalcein Green（组分A）的小瓶中并充分混合以制备CytoCalcein Green原液。 避光。

注意：20μL的CytoCalcein Green原液足以用于一个平板。 存放时，密封管。

 

2.工作溶液配制

将全部内容物（20μL）的CytoCalcein Green储备溶液和20μL碘化丙啶（组分B）加入10mL测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备CytoCalcein Green /碘化丙锭染料 - 工作溶液。 CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液在室温下稳定至少2小时。

注意：如果CHO细胞等细胞含有导致荧光染料随时间泄漏的有机阴离子转运蛋白，应制备丙磺舒储备溶液，并加入到加样缓冲液中，终孔内工作浓度范围为1到2.5 mM。 未使用的丙磺舒储备溶液可以在≤-20℃下储存。 由于染色条件可能因细胞类型的不同而异，因此建议单独确定组分A和B的适当浓度。

有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.用酶标仪或荧光显微镜进行细胞活力测定：

1.1根据需要用测试化合物处理细胞。

注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后加入100μL/孔/ 96孔板和25μL/孔/ 384孔板的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

1.2加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的CytoCalcein TM Green / Propidium Iodide染料加工溶液。

1.3将板在室温或37°C孵育30分钟至1小时，避光。 （孵育时间可以从15分钟到过夜。我们得到了佳结果，孵育时间少于4小时）。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。装载后请勿清洗细胞。对于非粘附细胞，建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟，然后关闭制动器。

1.4使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）和Ex / Em = 540 / 620nm（截止= 590nm，细胞死亡）或荧光下监测荧光强度用于活细胞的FITC过滤器或用于死细胞的TRITC过滤器的显微镜。

 

2.使用流式细胞仪进行细胞活力测定：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

2.1离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

2.3将细胞重悬于500μL的CytoCalcein™Green / Propidium Iodide染料加工溶液中。

2.4在室温或37°C孵育10至30分钟，避光。

可选：用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中，每管加入1-5×10⁵个细胞。

2.5用流式细胞仪在Ex / Em = 490 / 525nm和Ex / Em = 490 / 620nm（FL1和FL2通道）下监测荧光强度。