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胰凝乳蛋白酶荧光底物MeO-Succ-Arg-Pro-Tyr-AMC

英文名称:MeO-Succ-Arg-Pro-Tyr-AMC
产品参数
Ex (nm)341Em (nm)441
分子量819.78溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品货期

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产品优势

灵敏度高

 

产品介绍

MeO-Succ-Arg-Pro-Tyr-AMC是一种用于糜蛋白酶样蛋白酶的高灵敏度荧光底物。该无荧光底物酶解后可产生明亮的蓝色荧光AMC产物,其发射光谱可通过DAPI滤光片组轻松检测,目前已应用于角质层糜蛋白酶(SCCE)的蛋白酶活性监测。

实验方案

储备液配制

除非另有说明,所有未使用的储备液应在配制后分装成单次使用 aliquot,并于-20°C 保存。避免反复冻融。

MeO-Succ-Arg-Pro-Tyr-AMC 以冻干粉形式提供。配制 10 mM 储备液时,取 1 mg 该化合物溶于 122 µL DMSO 中。

 

工作液配制

使用反应缓冲液(100 mM Tris-HCl,pH 8.0,含 0.4 M NaCl 和 0.1% Triton X-100)将底物工作液终浓度配制为 20–50 µM。

注意:MeO-Succ-Arg-Pro-Tyr-AMC 工作液需现用现配,并避光保存。

 

实验操作流程

Well
Volume
STD1-STD7
50 µL AMC serial dilutions (0.078 µM-10 µM)
BL
50 µL reaction buffer
Test Sample
50 µL
Sample Buffer Control
50 µL of the buffer that the test sample is in

 

1.按上表布局制备 AMC 标准品(STD1-STD7)、空白对照(BL)及测试样本

2.向「测试样本」和「样本缓冲液对照」孔中各加入 50 µL 工作液

3.向 STD1-STD7 和 BL 孔中各加入 50 µL 反应缓冲液

4.避光条件下室温孵育 30-60 分钟(或使用动力学模式实时监测)

5.于 Ex/Em=360/470 nm(截止波长=435 nm)检测荧光信号