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磷酸盐检测试剂 MESG

英文名称:MESG *Phosphate assay reagent*
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量313.34溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

磷酸盐检测试剂 MESG 是美国AAT Bioquest生产的磷酸盐检测试剂,在无机磷酸盐存在下,MESG通过嘌呤核苷磷酸化酶(EC 2.4.2.1)转化为2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤,吸收波长变为红色。该特征已用于通过分光光度法定量磷酸盐。我们提供方便的MESG的磷酸盐检测试剂盒(#21659)。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的磷酸盐检测试剂 MESG 。

实验方案

操作步骤

1.准备分析试剂:

1.1使用前在室温下解冻所有四种成分。

1.2准备 MESG 底物(组分 B)溶液:将 500 μL 的 ddH2O 添加到 MESG 底物(组分 B)的小瓶中。通过涡旋充分混合以获得 MESG 底物溶液

注意: 250μl足以使一个平板制成单独使用的等分试样并立即储存在-20°C。

1.3制备嘌呤核苷磷酸化酶(组分 C)溶液:将 100 μL ddH2O 添加到嘌呤核苷磷酸化酶(PNP;组分 C)的小瓶中。涡旋混匀,得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液

1.4制备测定溶液:将全部体积的MESG底物溶液(来自步骤1.2)和嘌呤核苷磷酸化酶 溶液(来自步骤1.3)加入到测定缓冲液瓶(组分A)中,充分混合以得到测定溶液。将测定溶液置于冰上。

注1:该测定溶液在冰上稳定至少4小时。

注2:为达到理想的效果,需要紫外线透明板或比色皿。

注3:由于该测定对P i 的高灵敏度,使用无P i的实验室器皿非常重要

 

2. 准备连续稀释的磷酸盐标准品和/或测试样品:

2.1制备磷酸盐标准品: 将50μL1mMKH 2 PO 4(组分D)加入950μL去离子水或酶反应缓冲液中,得到50μM磷酸盐标准溶液。

2.250μM磷酸盐标准溶液200μL1:2系列稀释,得到25,12.5,6.25,3.125,1.56和0.78μM连续稀释的磷酸盐标准。

2.3根据表1和2,将含磷酸盐的测试样品和/或磷酸盐标准品加入透明的UV透明96孔微孔板中。

 

表1透明的UV透明96孔板中磷酸盐标准品和测试样品的方案

BL BL TS TS ...
PS1 PS1 ... ... ...
PS2 PS2      
PS3 PS3      
PS4 PS4      
PS5 PS5      
PS6 PS6      
PS7 PS7      

注意:PS =磷酸盐标准,BL =空白对照,TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

磷酸盐标准 空白 样本
连续稀释:50ul 不含磷酸盐的水或缓冲液:50ul 50ul

注意:将磷酸盐标准品的连续稀释液(0.1μM至50μM)加入PS1至PS7的孔中。

 

3.运行PhosphoWorks MESG磷酸盐测定:

3.1添加50μL/孔的测定溶液(来自S对 TEP 1.4) 中到的磷酸盐标准,空白对照和测试样品的孔中。彻底混合试剂。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL分析溶液。

3.2在室温下孵育30分钟。用酶标仪或分光光度计在360nm处监测吸光度。

注意:对于需要总体积大于100μL的比色皿测定,在测量吸收之前按比例增加样品和测定试剂的体积。

 

参考文献

Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: Richelle C Thomas, Paul E Chung, Shan P Modi, John G Hardy, Christine E Schmidt
Journal: European Polymer Journal (2016)

Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization
Authors: Marianne B Ariganello, Sidney Omelon, Fabio Variola, Rima M Wazen, Pierre Moffatt, Antonio Nanci
Journal: Journal of cellular biochemistry (2014): 2089--2102