MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒

产品货期

咨询

产品介绍

CTC 流式细胞术活菌检测试剂盒（CTC Flow Cytometric Live Bacteria Assay Kit）提供了一种简便易用的方法，可通过呼吸活性来评估细菌的健康状况与活力。​

CTC 本身不具有荧光性，一旦被活菌细胞表面的电子传递系统还原，就会形成红色且不溶于水的荧光 CTC 甲臜（CTC formazan），该物质可通过流式细胞仪检测到。不进行呼吸作用的死菌，或呼吸速率较低的不健康细菌，经 CTC 染色后不会产生红色荧光，或产生的红色荧光量较少。因此，该试剂盒可对细菌群体的健康状态进行半定量检测。​

样品实验方案

简要概述

1.准备10X染料储备液

2.准备细菌样本

3.将细菌样品与CTC在37°C孵育30分钟

4.PE-Texas Red通道通过流式细胞仪分析样品

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明,所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融。

CTC 储备液（10X）：

向装有 CTC（组分 A）的试剂瓶中加入 1 mL 蒸馏水，配制为 10 X浓度储备液。

注：该储备液在 - 20°C 下可稳定保存 2 周，需避光储存。

操作步骤

1.准备细菌样品，浓度为10⁶细胞/ ml。在适宜培养基中培养细菌至对数生长后期（late log phase），以 10,000×g 的离心力离心 10 分钟去除培养基，再用适量磷酸盐缓冲液（PBS）重悬沉淀。

注意：通过测定细菌培养物在 600 nm 波长下的光密度（OD₆₀₀）来确定细胞数量。对于大肠杆菌（E. coli）培养物，OD₆₀₀=1.0 时相当于 8×10⁸个细胞 / mL。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。以 10,000×g 的离心力离心 10 分钟去除处理液，再用适量检测缓冲液（组分 B）重悬沉淀，使处理后样本中的细菌浓度与活细菌样本浓度一致

注意：死细菌可以作为阴性对照。建议用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.将10 µL 10X CTC储备溶液加到90 µL细菌样品中。

4.充分混合，然后在黑暗中于37°C孵育30分钟。

5.在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加400 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

6.用流式细胞仪通过PE-Taxes Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）监测细菌的荧光。

注 1：为排除杂质干扰，建议将流式细胞仪的阈值设置为：前向散射光（FSC）>10,000，侧向散射光（SSC）>5,000。

注 2：CTC 的染色效率高度依赖细菌菌株，因此需根据具体菌株优化染色条件。