鬼笔环肽-iFluor 514标记

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产品优势  

高特异性结合：选择性结合F-肌动蛋白（纤维状肌动蛋白），几乎不与G-肌动蛋白（单体肌动蛋白）结合，能清晰显示细胞骨架的精细结构。

低背景干扰 ：信噪比高，背景低，成像清晰。

 

适用样品类型

仅用于固定细胞。固定和透化细胞、细胞培养、无细胞实验、甲醛固定和透化组织切片

 

产品介绍

鬼笔环肽-iFluor 514标记（等效于Alexa Fluor® 514标记的鬼笔环肽）能够特异性结合F-肌动蛋白。作为便捷的分子探针，鬼笔环肽衍生物在纳摩尔浓度下即可用于标记、识别和定量分析甲醛固定透化处理的组织切片、细胞培养体系或无细胞实验中的F-肌动蛋白。鬼笔环肽与肌动蛋白丝的结合亲和力显著高于肌动蛋白单体，其作用机制主要体现在：1）显著降低肌动蛋白亚基从纤丝末端解离的速率常数；2）通过抑制纤丝解聚过程来稳定肌动蛋白丝结构；3）抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。

鬼笔环肽在细胞内的作用具有浓度依赖性：当低浓度导入细胞质时，它能募集低聚合状态的胞质肌动蛋白和细丝蛋白，形成稳定的肌动蛋白聚合物"岛"，但不会影响应力纤维（即微丝粗束）的结构特征。通过荧光标记鬼笔环肽类似物对肌动蛋白丝进行染色观察，已成为研究细胞内F-肌动蛋白分布的重要工具。

荧光鬼笔环肽衍生物在生物医学研究领域展现出重要价值：1）可用于活细胞/固定细胞中肌动蛋白丝的精准定位；2）实现体外单根肌动蛋白丝的高清可视化；3）适用于高分辨率肌动蛋白网络研究，这类衍生物已广泛应用于细胞骨架研究。为满足多元化的实验需求，AAT Bioquest公司提供涵盖不同荧光标记的鬼笔环肽衍生物系列产品，为多色荧光成像研究提供全面解决方案。

 

注意事项

产品外观形态：液体（浓度1mg/ml）（注：鬼笔环肽系列产品有固体和液体两种，液体为DMSO溶解后的产品，则不需再溶解。）

样品分析方案

概述

1.将样本置于微孔板孔中

2.吸弃孔内液体

3.每孔加入100 μL鬼笔环肽-iFluor 514标记液

4.室温避光孵育20–90分钟

5.清洗细胞去除未结合染料

6.使用TRITC滤光片进行荧光显微镜观察

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

 

储存条件

-20℃避光保存可稳定至少6个月，避免反复冻融

鬼笔环肽具毒性（半数致死量LD50=2 mg/kg），虽单管含量极低（仅对蚊虫可能致命），仍需谨慎操作

 

工作溶液配置

鬼笔环肽-iFluor 514标记工作溶液

取1 µL鬼笔环肽-iFluor 514标记原液加入1 mL含1% BSA的PBS缓冲液中混匀。

注意1. 鬼笔环肽标记原液需分装后-20℃避光保存

       2.不同细胞类型染色效果可能存在差异，建议根据实际情况调整工作液浓度

 

样本实验操作流程

细胞染色

1.使用3.0-4.0%甲醛PBS溶液室温固定细胞10-30分钟

注意：避免使用含甲醇固定剂，甲醇会破坏肌动蛋白结构。推荐使用无甲醇甲醛固定剂

2.PBS缓冲液洗涤固定后细胞2-3次

可选：为提高通透性，可加入0.1% Triton X-100 PBS溶液处理3-5分钟，之后用PBS洗涤2-3次

3.向96孔板每孔加入100 μL鬼笔环肽-iFluor 514工作液，室温避光染色20-90分钟

4.用PBS轻柔洗涤2-3次去除多余标记物，封片后使用TRITC滤光片组进行荧光显微镜观察

 

试剂应用文献

Isolated Botanical Polyphenol Actin-Binding Compounds Impact Human Dermal Fibroblast Morphology: Potential Anti-Aging Effects and Insight Into YAP/TAZ Mechanical Cytoskeletal Modulation
Authors: Elia, Marina
Journal: (2024)