PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*

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产品介绍

磷酸盐广泛参与多种生物反应。例如，磷酸酶、ATP酶及其他多种酶类可催化底物释放无机磷酸盐（Pi）的反应。本PhosphoWorks™磷酸盐检测试剂盒专为检测各类产Pi酶活性而开发，其检测方案灵敏度高，既可替代具有危险性的放射性检测方法，也优于其他灵敏度较低的比色检测法。

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒通过检测孔雀石绿衍生物在钼酸盐存在下的吸光度变化来定量磷酸盐。与现有孔雀石绿染料配方相比，本产品能获得完全稳定的终点信号，且不易产生沉淀。

适用仪器

操作步骤

简要概述

准备测试样品或磷酸盐标准品（80μL）
添加MG Plus 试剂（组分B）（20μL）
在室温下孵育10-40分钟
监测600-660nm的吸光度或分光光度计

制备标准溶液

磷酸盐标准配制

在950μL去离子水或酶反应缓冲液中加入50μL1mM磷酸盐标准品（组分A），得到50μM磷酸盐标准溶液（PS7）。 取50μM磷酸盐标准溶液（PS7）并进行1：2连续稀释，用去离子水或酶反应缓冲液获得连续稀释的磷酸盐标准品（PS6-PS1）。

样品实验方案

表1.透明96孔微孔板中磷酸盐标准品和测试样品的布局。

PS =磷酸盐标准品（PS1-PS7,0.78至50μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1.根据表1和2中提供的布局制备磷酸盐标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用40μL试剂代替80μL。

2.使用前摇匀MG Plus 试剂（组分B）。

3.向磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入20μLMGPlus™试剂（组分B），使总磷酸盐测定体积为100μL/孔。彻底混合试剂。对于384孔板，在每个孔中加入10μLMGPlus™试剂（组分B），总体积为50μL/孔。

4.在含磷酸盐的孔中将在10至40分钟内产生蓝绿色。使用吸光度酶标仪在600 - 660 nm处监测吸光度或使用分光光度计。

注意：在高磷酸盐浓度（>100μM）下，可能会形成沉淀。稀释样品并重新进行分析。

注意：对于需要总体积大于100μL的比色皿测定，在测量吸收之前，将样品体积和MG Plus 试剂（组分B）按比例加倍或用1M H 2 SO 4或1M HCl稀释最终反应混合物。