PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒

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产品优势

在100 µL反应体系中可检测低至0.4 µM的ATP

 

适用范围

用于ATP检测

 

产品介绍

三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量学、代谢调控和细胞信号传导中发挥着核心作用，被誉为细胞内能量转移的"分子货币"，驱动活细胞中多种过程及化学合成。ATP还可作为细胞通讯的信号分子，并在DNA与RNA合成中起重要作用。

AAT Bioquest提供多种生物发光检测试剂盒（产品货号21610和21609），通过重组萤火虫荧光素酶可检测纳摩尔（nM）级别的ATP浓度。这些需搭配酶标仪使用的试剂盒，常用于细胞活力或细胞毒性检测。

PhosphoWorks™荧光法ATP检测试剂盒利用系列ATP诱导的酶偶联反应产生过氧化氢，并通过Amplite®红色底物对其进行分光光度法定量。在100 µL反应体系中可检测低至0.4 µM的ATP，且几乎不受ADP和AMP的干扰，为生物样本中的ATP水平检测提供了稳定、简便且高效的解决方案。该荧光法ATP检测与我们基于荧光素酶的ATP检测试剂盒形成互补检测

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液（50 µL）

2.添加ATP标准液或测试样品（50 µL）

3.在室温下孵育10-30分钟

4.监测荧光强度变化（激发波长/发射波长=540/590 nm，截止波长570 nm

 

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融。

Amplite 红色底物储备液（200X）：

向Amplite™红色底物（组分A）瓶中加入30 µL DMSO（组分E），配制200X Amplite™红色底物储备液

ATP标准溶液（10mM）：
向ATP标准品（组分D）瓶中加入0.5 mL ddH2O，配制10 mM ATP标准溶液

 

标准溶液制备

ATP标准品

推荐使用系列稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/21620

取10 µL 10 mM ATP标准溶液加入990 µL 1X PBS缓冲液，生成100 µM ATP标准溶液（AS7）。取100 µM ATP标准溶液（AS7）进行1:3系列稀释，获得梯度浓度ATP标准品（AS6-AS1）

 

工作溶液制备

1.向酶混合液瓶（组分B）中加入5 mL检测缓冲液（组分C），充分混匀

向酶混合液瓶中加入25 µL 200X Amplite™红色底物储备液，混匀后制成ATP工作液

 

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品（AS1-AS7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.14至100 µM）
BL	50ul	1 X PBS缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备ATP标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光增加。

 

试剂应用文献

Photothermal-Responsive Conjugated Polymer Nanoparticles Triggered Precise Augmentation of Microalgal Photosynthesis
Authors: Zhang, Miaomiao and Gao, Chenying and Wang, Pengcheng and Li, Rui and Huang, Yiming and Lv, Fengting and Li, Cheng and Bai, Haotian and Zhang, Deqing and Wang, Shu
Journal: ACS nano (2025)