PhosphoWorks 荧光磷酸盐检测试剂盒*红色荧光*
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
操作步骤
简要概述
准备测试样品或磷酸盐标准品（40μL）
加入等体积的分析缓冲液（40μL）
添加磷酸盐工作溶液（20μL）
在室温下孵育15至60分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）
溶液制备
1.制备储备溶液
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1磷酸盐储备液（125X）：
在磷酸盐（组分B）中加入20μLDMSO，制成125X磷酸盐原液。
2.制备标准溶液
磷酸盐标准溶液
将50μL的1mM KH 2 PO 4（组分C）加入950μL去离子水或酶反应缓冲液中，得到50μM磷酸盐标准溶液（PS7）。 取50μM磷酸盐标准溶液（PS7）并进行1：2连续稀释，用去离子水或酶反应缓冲液得到连续稀释的磷酸盐标准品（PS6-PS1）。
3.制备工作溶液
将20μL125X磷酸盐储备溶液加入2.5 mL无菌H2O中，充分混合，制成磷酸盐工作溶液。 避免潜在的Pi污染。 注意：避免磷酸盐（组分B）直接暴露在光线下。 由于该测定法对Pi的高灵敏度，使用无Pi实验室器皿和试剂极为重要。
样品实验方案
在pH 6.5至7.4下进行磷酸盐测定
表1.实心黑色96孔微孔板中磷酸盐标准品和测试样品的布局。
PS =磷酸盐标准品（PS1-PS7,0.78至50μM），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| PS1 | PS1 | ... | ... |
| PS2 | PS2 | ... | ... |
| PS3 | PS3 | ||
| PS4 | PS4 | ||
| PS5 | PS5 | ||
| PS6 | PS6 | ||
| PS7 | PS7 |
表2.每个孔的试剂组成。
| 孔 | 规格 | 试剂 |
| PS1-PS7 | 40ul | 连续稀释液（0.78至50μM） |
| BL | 40ul | H2O或酶反应缓冲液 |
| TS | 40ul | 样品 |
1.根据表1和2中提供的布局制备磷酸盐标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用20μL试剂代替40μL。
2.向磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入40μL测定缓冲液（组分A）和20μL磷酸盐工作溶液，使总磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入20μL测定缓冲液（组分A）和10μL磷酸盐工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.将反应混合物在室温下孵育15至60分钟。
4.用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光增加。
试剂应用文献
Pseudomonas aeruginosa lasR-deficient mutant contributes to bacterial virulence through enhancing the PhoB-mediated pathway in response to host environment
