活细胞荧光示踪探针ReadiUse CFSE CAS 150347-59-4

产品货期

咨询

适用范围

用于活细胞示踪

产品介绍

对细胞进行荧光标记是确定样本中总细胞数或活细胞数量的有效方法。流式细胞术与荧光染色相结合，是分析异质细胞群的强大工具。

荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物是非荧光分子，可扩散进入细胞，并被细胞内非特异性酯酶水解生成荧光产物。这些荧光产物仅能累积在细胞膜完整的细胞中，因此细胞膜破损的死细胞不会被染色。FDA及其类似物（如CDCFDA）的膜转运和细胞内水解动力学与细胞功能密切相关，因此FDA标记可用于通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞。不同细胞系和菌株经FDA染料标记后的荧光强度差异较大，这可能是由于细胞内酯酶活性不同所致。

CFSE是一种胺反应性FDA衍生物，广泛用于通过流式细胞仪监测细胞增殖。AAT Bioquest提供适合流式细胞术使用的便捷包装规格。每支 CFSE 可加入 90 μL 无水 DMSO 配制成 10 mM 的储备液。DMSO 储备液应避光保存，在-20°C干燥条件下保存，避免反复冻融

操作步骤

1.准备10 mMDMSO储备溶液

＃22022：将5.6mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.8mM）; 

＃22028，向每个小瓶中加入90μLDMSO以制备10mM储备溶液。

注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在< -20 ^o C冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。

2.准备CFSE工作解决方案

在使用前准备CFSE 工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液稀释来自步骤1 的DMSO储备液（2 000至2,000次），pH值7.通过涡旋混合均匀。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

3.2离心细胞，每管取1-5×10 ⁵个细胞。

3.3将细胞重悬于500μL 染料工作溶液中（来自步骤2）。

3.4在室温或37 ° C 下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，每管获得1-5×10 ^5个细胞。

3.6使用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。