ReadiUse™ 预活化 APC-Cy5.5 串联染料

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产品优势  

1.提高反应效率：通过活化试剂，使其更容易与目标分子结合

2.简化实验流程：预活化后，无需再进行复杂的活化步骤，可直接使用

3.多色检测能力：适用流式细胞术的多色成像，避免光谱重叠

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

APC-Cy5.5 是一种常用于流式细胞术的荧光染料。其主要吸收峰位于 651 nm，发射峰位于 ~700 nm。AAT Bioquest 提供预活化的 APC-Cy5.5，可高效偶联抗体及链霉亲和素等蛋白类二抗试剂。预活化 APC-Cy5.5 串联染料可以直接用于偶联反应，相较于SMCC的偶联工艺，我们的预活化染料可实现：1）更高的偶联产率；2）通过蛋白中丰富的氨基基团直接偶联（传统SMCC化学需依赖还原再生硫醇基团）。

藻蓝蛋白（ APC） 是一种从蓝绿藻（如螺旋藻）中分离得到的藻胆蛋白。与其他藻胆蛋白类似，APC 具有荧光特性，具有高的吸光度和高量子效率。可以通过传统的蛋白质交联技术轻松与抗体及其他蛋白质连接的蛋白质，且不会改变其光谱特性。

实验方案示例
使用 Buccutite™ MTA 制备预活化抗体

1.将 Buccutite™ MTA 在 DMSO 中复溶至约 10 mg/mL。

注意：未使用的 Buccutite™ MTA 应储存于 -20°C，最多可两次冻融。

2.在 pH = 8.5 - 9.0 的缓冲液中制备目标抗体，浓度需高于 1 mg/mL。

3.按每 100 µg 抗体加入 8 - 10 µg Buccutite™ MTA 的比例，将 Buccutite™ MTA 加入抗体溶液中。

4.充分混匀，室温反应 60 分钟，反应期间需旋转混合。

5.用脱盐柱纯化反应混合物，以去除未反应的 Buccutite™ MTA，并将缓冲液置换为 PBS 或您选择的缓冲液。

6.收集 Buccutite™ MTA 活化的抗体，并按初始抗体量的 70% 产率估算其浓度。

与预活化 APC-Cy5.5 偶联

1.将预活化的 APC-Cy5.5 溶于 100 µL ddH2O 中，配制成 10 mg/mL 溶液。

注意：复溶后的预活化 APC-Cy5.5 可在 4°C 避光条件下保存一个月。

2.按每 100 µg MTA 活化抗体加入 130 µg APC-Cy5.5 的比例，将 APC-Cy5.5 直接加入 MTA 活化的目标抗体溶液中。

3.室温旋转混合 60 分钟。

4.此时，抗体/APC-Cy5.5 偶联物即可使用。

注意：抗体偶联物应在含有载体蛋白（例如 0.1% 牛血清白蛋白）和 0.02% - 0.05% 叠氮化钠的条件下，保存于 > 0.5 mg/mL 的浓度。抗体/APC-Cy5.5 偶联物溶液可在 4°C 避光条件下保存最长两个月。

5.（可选）抗体/APC-Cy5.5 偶联物可通过尺寸排阻色谱法进一步纯化，以获得好的性能。