ReadiUse 预活化PE-Cy5 Tandem

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产品优势  

1.提高反应效率：通过活化试剂，使其更容易与目标分子结合

2.简化实验流程：预活化后，无需再进行复杂的活化步骤，可直接使用

3.多色检测能力：适用流式细胞术的多色成像，避免光谱重叠

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

PE-Cy5是一种常用于流式细胞术的荧光染料。它的主要吸收峰位于565nm，发射峰位于666nm。推荐使用 682/33 nm 和 695/40 nm 的滤光片组来检测这种串联染料。AAT Bioquest提供预活化的PE-Cy5，可高效偶联抗体及链霉亲和素等蛋白类二抗试剂。预活化 PE-Cy5 串联染料可以直接用于偶联反应，相较于SMCC的偶联工艺，我们的预活化染料可实现：1）更高的偶联产率；2）通过蛋白中丰富的氨基基团直接偶联（传统SMCC化学需依赖还原再生硫醇基团）。

概览

关键的PE-Cy5串联染料已用我们的Buccutite™ FOL进行预修饰。您的抗体（或其他蛋白）则用我们的Buccutite™ MTA进行修饰，得到MTA修饰的蛋白。MTA修饰的蛋白会与试剂盒中提供的FOL修饰的PE-Cy5串联染料轻松反应，生成所需的PE-Cy5串联染料-抗体偶联物。

实验流程示例

用Buccutite™ MTA制备预活化的抗体

1.将Buccutite™ MTA溶于DMSO中，配制成约10 mg/mL的溶液。

*注：未使用的MTA需储存于-20°C，最多可两次冻融。*

2.将目标抗体（Ab）置于pH = 8.5–9.0的缓冲液中，配制成浓度高于1 mg/mL的溶液。

3.按照每100 μg抗体加入8–10 μg MTA的比例，将MTA加入抗体溶液中。

4.充分混匀，室温下反应60分钟，反应过程中需进行旋转混合。

5.使用脱盐柱纯化反应混合物，去除未反应的MTA，并将缓冲液置换为PBS或您选择的其他缓冲液。

6.收集MTA活化的抗体。按原始起始量的70%产率估算抗体浓度。

与预活化的PE-Cy5串联染料偶联

1.将预活化的PE-Cy5串联染料溶于100 μL ddH₂O中，配制成10 mg/mL的溶液。

*注：溶解后的预活化PE-Cy5串联染料不稳定，保存时间不得超过一个月。*

2.按照每100 μg MTA活化的抗体加入300 μg PE-Cy5串联染料的比例，将预活化的PE-Cy5串联染料直接加入MTA活化的目标抗体溶液中。

3.室温下旋转混合1–2小时。

4.此时抗体/PE-Cy5串联染料偶联物即可使用。

*注：抗体偶联物应在载体蛋白（例如0.1%牛血清白蛋白）和0.02–0.05%叠氮化钠存在下，以>0.5 mg/mL的浓度保存。*

*注：抗体/PE-Cy5串联染料偶联物可在4°C下保存两个月。*