ReadiUse 预活化PE-Cy7 Tandem

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产品优势  

1.提高反应效率：通过活化试剂，使其更容易与目标分子结合

2.简化实验流程：预活化后，无需再进行复杂的活化步骤，可直接使用

3.多色检测能力：适用流式细胞术的多色成像，避免光谱重叠

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

PE-Cy7是一种常用于流式细胞术的荧光染料。它的主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm。AAT Bioquest提供预活化的PE-Cy7，可高效偶联抗体及链霉亲和素等蛋白类二抗试剂。预活化 PE-Cy7串联染料可以直接用于偶联反应，相较于SMCC的偶联工艺，我们的预活化染料可实现：1）更高的偶联产率；2）通过蛋白中丰富的氨基基团直接偶联（传统SMCC化学需依赖还原再生硫醇基团）

概览

重要提示：PE-Cy7 串联染料已使用我们的 Buccutite™ FOL 进行预修饰。您的抗体（或其他蛋白质）使用我们的 Buccutite™ MTA 进行修饰，得到 MTA 修饰的蛋白。MTA 修饰的蛋白与（提供的）FOL 修饰的 PE-Cy7 串联染料 readily 反应，生成所需的 PE-Cy7 串联染料-抗体偶联物。

样品实验方案

使用Buccutite™ MTA制备预活化抗体

1.将Buccutite™ MTA溶解于DMSO中，浓度约为10 mg/mL。

注：未使用的MTA需保存于-20°C；可最多两次冻融。

2.在pH = 8.5 - 9.0的缓冲液中制备目标抗体（Ab），浓度需高于1 mg/mL。

3.按每100 µg抗体加入8 - 10 µg MTA的比例，将MTA加入抗体溶液中。

4.充分混匀，室温反应60分钟，反应过程中需保持旋转。

5.使用脱盐柱纯化反应混合物，去除未反应的MTA。将缓冲液置换为PBS或其他所需缓冲液。

6.收集经MTA活化的抗体。按起始抗体量的70%得率估算浓度。

与预活化的PE-Cy7串联染料偶联

1.将预活化的PE-Cy7串联染料溶解于100 µL ddH₂O中，浓度为10 mg/mL。

注：溶解后的预活化PE-Cy7串联染料不稳定，保存时间不得超过一个月。

2.按每100 µg MTA活化抗体加入300 µg PE-Cy7串联染料的比例，将预活化的PE-Cy7串联染料直接加入MTA活化的目标抗体溶液中。

3.室温下旋转混合物1 - 2小时。

4.此时抗体/PE-Cy7串联染料偶联物即可使用。

注：抗体偶联物应在存在载体蛋白（如0.1%牛血清白蛋白）和0.02-0.05%叠氮化钠的条件下，保存浓度高于0.5 mg/mL。

注：抗体/PE-Cy7串联染料偶联物可在4°C下保存两个月。

5.可选：可通过尺寸排阻色谱法进一步纯化抗体/PE-Cy7串联染料偶联物，以获得好的性能。