英文flag致电:029-68064558
搜索

Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒

英文名称:ReadiUse™ Rapid Luminometric ATP Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,三磷酸腺苷(ATP)在细胞能量学,代谢调节和细胞信号传导中起着重要作用。 ATP的定量可用于各种生物应用。由于ATP是几乎所有活生物体的能源,在缺乏有生物体的情况下它们迅速降解,因此其存在可用于识别活生物体的存在。 ATP的测量已用于细胞毒性,表面细菌的检测,水中细菌的定量,培养中的体细胞和食品质量。使用萤火虫生物发光来测量ATP是由McElroy提出的,他发现ATP对于轻量生产至关重要。萤火虫萤光素酶是单体61kD酶,其催化荧光素的两步氧化,其在560nm处产生光。涉及通过ATP活化蛋白质以产生反应性混合酸酐中间体。在第二步中,活性中间体与氧反应产生一过性二氧杂环丁烷,其迅速分解为氧化产物oxyluciferin和二氧化碳以并放出光。当ATP是限制性成分时,光的强度与ATP的浓度成比例。因此,光强度的测量可以用于使用发光计来量化ATP。 AAT Bioquest的ReadiUse 快速发光测定ATP分析试剂盒(不含DTT)带有即用型所有必需组分。它为监测哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性提供了一种快速,简单和均匀的发光测定法。该测定基于使用萤火虫萤光素酶来催化ATP和萤光素释放光的ATP的检测。它可以在化学发光酶标仪上以便利的96孔或384孔微量滴定板格式进行。该测定非常灵敏,可以检测50个细胞/孔。它具有稳定的半衰期超过2小时的发光信号。此ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂盒不含DTT。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒。 

 

适用仪器


发光酶标仪  
推荐孔板: 白色孔板
实验方案

操作步骤

简要概述
1.用测试化合物(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)制备细胞(样品)
2.添加等量即用型ReadiUse 快速发光检测ATP检测试剂(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度

注意:为达到佳效果,建议使用白色孔板。 在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

制备

为方便起见,请使用在线稀释计算器

用ddH2O或适当的缓冲液制备1mM ATP储备溶液,然后进行连续稀释以达到10 pM至10μM的ATP浓度。

有关细胞样品制备的指南(点击查看)

 

样品实验方案

表1.白色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 SD = ATP标准,BL =空白对照,TS =测试样品

BL BL TS TS
SD1 SD1 ... ...
SD2 SD2 ... ...
SD3 SD3 ... ...
SD4 SD4 ... ...
SD5 SD5 ... ...
SD6 SD6 ... ...
SD7 SD7 ... ...

 

表2.每个孔的试剂组成

孔板 规格 试剂
SD1-SD7 100ul 连续稀释ATP(例如10 pM至10μM)
BL 100ul ATP分析缓冲液(组分A)
TS 100ul 样品

 

1.用测试化合物处理细胞(或样品),在96孔板中加入10μL10X化合物,或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。 对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在37℃,5%CO2培养箱中孵育所需的时间段,例如24,48或96小时。
3.加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂。
4.在室温下孵育10-20分钟。 注意:将未使用的ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂等分并保存在-20 ℃,避免反复冻融循环。
5.用标准光度计监测发光强度。
 
数据分析
 
        从空白标准孔获得的读数(RLU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算细胞样本。 我们建议使用在线线性回归计算器,该计算器可在以下位置找到:
图1.细胞数与发光信号相关。 使用ClaiStar板读数器(BMG Labtech)在96孔白板中使用ReadiUse Rapid Luminometric ATP Assay Kit测量不同的Jurkat细胞数(2倍稀释)。 该试剂盒可检测低至50个细胞。 在孵育15分钟或2小时后,发光信号和细胞数之间存在线性关系(r2> 0.99)。 发光信号的半衰期超过2小时。
 
 
参考文献

High throughput cell-based assay for identification of glycolate oxidase inhibitors as a potential treatment for Primary Hyperoxaluria Type 1
Authors: Mengqiao Wang, Miao Xu, Yan Long, Sonia Fargue, Noel Southall, Xin Hu, John C McKew, Christopher J Danpure, Wei Zheng
Journal: Scientific Reports (2016)

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

The Different Effects of Atorvastatin and Pravastatin on Cell Death and PARP Activity in Pancreatic NIT-1 Cells
Authors: Ya-Hui Chen, Yi-Chun Chen, Chin-San Liu, Ming-Chia Hsieh
Journal: Journal of Diabetes Research (2016)

BPA-induced DNA hypermethylation of the master mitochondrial gene PGC-1α contributes to cardiomyopathy in male rats
Authors: Ying Jiang, Wei Xia, Jie Yang, Yingshuang Zhu, Huailong Chang, Juan Liu, Wenqian Huo, Bing Xu, Xi Chen, Yuanyuan Li
Journal: Toxicology (2015): 21--31

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Endocrine-related cancer (2015): 577--591

JQ1 suppresses tumor growth through downregulating LDHA in ovarian cancer
Authors: Haifeng Qiu, Amanda L Jackson, Joshua E Kilgore, Yan Zhong, Leo Li-Ying Chan, Paola A Gehrig, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Oncotarget (2015): 6915

Loss of histone deacetylase Hdac1 disrupts metabolic processes in intestinal epithelial cells
Authors: Alexis Gonneaud, Naomie Turgeon, Frančois-Michel Boisvert, Frančois Boudreau, Claude Asselin
Journal: FEBS letters (2015): 2776--2783

A neutrophil intrinsic impairment affecting Rab27a and degranulation in cystic fibrosis is corrected by CFTR potentiator therapy
Authors: Kerstin Pohl, Elaine Hayes, Joanne Keenan, Michael Henry, Paula Meleady, Kevin Molloy, Bakr Jundi, David A Bergin, Cormac McCarthy, Oliver J McElvaney
Journal: Blood (2014): 999--1009

Fluorescence lifetime imaging unravels C. trachomatis metabolism and its crosstalk with the host cell
Authors: Márta Szaszák, Philipp Steven, Kensuke Shima, Regina Orzekowsky-Schroder, Gereon Huttmann, Inke R Konig, Werner Solbach, Jan Rupp
Journal: PLoS pathogens (2011): e1002108

G protein coupled receptor kinase 2 interacting protein 1 (GIT1) is a novel regulator of mitochondrial biogenesis in heart
Authors: Jinjiang Pang, Xiangbin Xu, Michael R Getman, Xi Shi, Stephen L Belmonte, Heidi Michaloski, Amy Mohan, Burns C Blaxall, Bradford C Berk
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2011): 769--776