钙离子荧光探针Rhod5N,AM

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产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适用范围广：通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等，监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子检测在众多生物学研究中至关重要。能对Ca²⁺结合产生光谱响应的荧光探针，使研究人员得以通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光微孔板检测仪等技术手段，研究细胞内游离钙离子浓度的动态变化。

与其他BAPTA基指示剂相比，Rhod-5N对Ca²⁺的结合亲和力较低（Kd≈320 µM），特别适用于10 µM至1 mM范围内的钙离子检测。与Rhod-2类似，Rhod-5N在二价阳离子缺失条件下基本无荧光，而在结合Ca²⁺后会产生显著荧光增强（且无光谱位移）。Rhod-5N AM是该探针的细胞膜渗透性版本。

实验方案示例

储备液配制

所有未使用的储备液应分装为单次使用量，配制完成后保存于-20°C。避免反复冻融。

Rhod-5N AM储备液配制

使用无水DMSO配制2-5 mM的Rhod-5N AM储备液。

工作液配制

Rhod-5N AM工作液配制

1.实验当天，将Rhod-5N AM溶解于DMSO或取储备液分装室温解冻。

2.选择适当缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM Rhod-5N AM工作液。对于大多数细胞系，建议终浓度为4-5 μM。具体加载浓度需通过实验优化确定。

注意：1.Pluronic® F-127可提高Rhod-5N AM的水溶性，多种Pluronic® F-127溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在染料工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度为0.5-1 mM）以减少脱酯化指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性钠盐和稳定化溶液可从百萤生物购买。

实验操作流程

以下是活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据具体需求进行调整

1.在生长培养基中培养细胞过夜

2.次日向细胞板中加入1X Rhod-5N AM工作液

注意：若待测化合物与血清有干扰，应在染料加载前更换为新鲜HHBS缓冲液

3.将加载染料的细胞板置于37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟

注意：某些细胞系延长孵育时间（>1小时）可提高信号强度

4.用HHBS或自选缓冲液（含阴离子转运抑制剂如1 mM丙磺舒）替换染料工作液，去除多余探针

5.加入刺激剂后，立即使用配备TRITC滤光片组的荧光显微镜 或者 集成程控液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）激发/发射波长=540/590 nm，截止波长570 nm 检测荧光信号

试剂应用文献

Granulosa cell-specific FOXJ2 overexpression induces premature ovarian insufficiency by triggering apoptosis via mitochondrial calcium overload
Authors: Zhang, Yunxia and Wu, Qiqian and Bai, Furong and Hu, Yanqin and Xu, Bufang and Tang, Yujie and Wu, Jingwen
Journal: Journal of Ovarian Research (2025): 75