钙离子荧光探针Rhod-FF, AM
| Ex (nm) | 553 | Em (nm) | 577 |
| 分子量 | 1145.90 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。
2.适用范围广：通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等，监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
钙离子检测在众多生物学研究中具有关键作用。能够与Ca²⁺结合并产生光谱响应的荧光探针，使研究人员得以通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术手段，精确监测细胞内游离钙离子浓度的动态变化。
Rhod-FF AM作为细胞膜通透性探针，经细胞内酯酶水解后生成Rhod-FF。其与Ca²⁺的结合亲和力较低，特别适用于10-200 μM浓度范围的钙离子检测。与Rhod-2类似，Rhod-FF在二价阳离子缺失条件下基本无荧光，而在结合Ca²⁺后会产生显著的荧光增强效应，且不会出现光谱位移现象。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | TRITC 滤波片组 |
| Em： | TRITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式/可分液处理 |
溶解方案(溶剂以说明书为准)
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 87.268 µL | 436.338 µL | 872.676 µL | 4.363 mL | 8.727 mL |
| 5 mM | 17.454 µL | 87.268 µL | 174.535 µL | 872.676 µL | 1.745 mL |
| 10 mM | 8.727 µL | 43.634 µL | 87.268 µL | 436.338 µL | 872.676 µL |
实验方案示例
储备液配制
所有未使用的储备液应分装为单次使用量，配制完成后保存于-20°C。避免反复冻融。
Rhod-FF AM储备液配制
使用无水DMSO配制2-5 mM的Rhod-FF AM储备液。
工作液配制
Rhod-FF AM工作液配制
1.实验当天，将Rhod-FF AM溶解于DMSO或取储备液分装室温解冻。
2.选择适当缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM Rhod-FF AM工作液。对于大多数细胞系，建议终浓度为4-5 μM。具体加载浓度需通过实验优化确定。
注意：1.Pluronic® F-127可提高Rhod-FF AM的水溶性，多种Pluronic® F-127溶液可从百萤生物购买。
2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在染料工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度为0.5-1 mM）以减少脱酯化指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性钠盐和稳定化溶液可从百萤生物购买。
实验操作流程
以下是活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据具体需求进行调整
1.在生长培养基中培养细胞过夜
2.次日向细胞板中加入1X Rhod-FF AM工作液
注意：若待测化合物与血清有干扰，应在染料加载前更换为新鲜HHBS缓冲液
3.将加载染料的细胞板置于37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟
注意：某些细胞系延长孵育时间（>1小时）可提高信号强度
4.用HHBS或自选缓冲液（含阴离子转运抑制剂如1 mM丙磺舒）替换染料工作液，去除多余探针
5.加入刺激剂后，立即使用配备TRITC滤光片组的荧光显微镜 或者 集成程控液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）激发/发射波长=540/590 nm，截止波长570 nm 检测荧光信号
