Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*
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产品货期
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产品优势
支持96孔或384孔微孔板模式，可轻松实现自动化检测
适用范围
用于MDR泵抑制剂高通量筛选或鉴定高活性MDR泵细胞
产品介绍
肿瘤细胞对细胞毒性药物的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍之一。某些肿瘤先天耐药，始终对细胞抑制药物治疗无反应；其他肿瘤初期反应良好，但最终会复发并产生耐药性。这种现象可能是由所使用的抗肿瘤药物诱导的基因突变所致，也可能代表了恶性肿瘤中预先存在的耐药细胞群体的选择性扩增。多药耐药（MDR）是导致多种化疗方案失败的主要因素。过去几年中，学界普遍认为化疗耐药性与至少两种ATP依赖性药物外排泵的过度表达相关。这两种细胞膜蛋白——P-糖蛋白（Pgp, MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP1）——同属ABC转运蛋白家族。
Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒采用荧光MDR指示剂来检测这两种MDR泵的活性。该疏水性荧光染料分子能快速穿透细胞膜并被截留在细胞内。经短暂孵育后，细胞内游离染料浓度可显著升高。在表达MDR1和/或MRP1的细胞中，该染料会被MDR转运泵排出，从而导致细胞荧光强度降低。然而当使用干扰MDR1和/或MRP1泵活性的物质进行阻断时，细胞荧光强度会显著增强。
Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒提供所有必需组分并配套优化检测方案，支持96孔或384孔微孔板操作模式，可轻松实现自动化检测。该试剂盒是进行MDR泵抑制剂高通量筛选或鉴定高活性MDR泵细胞的理想工具。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 520 nm |
| Cutoff： | 510 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取 |
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞
2.添加MDR抑制剂或化合物
3.添加MDR染料加载溶液（96孔板每孔100 µL，384孔板每孔25 µL）
4.在室温下孵育1小时
5.使用底部读取模式，在激发/发射波长 = 490/525 nm下监测荧光强度
试剂储存
除非另有说明，所有未使用的储备液在配制后均应分装为单次使用量，并于-20°C 冷冻储存。应避免反复冻融。
溶液配制
储备溶液配制
MDR指示剂储备溶液：
将20 µL（#36340-1板）或200 µL（#36341-10板）添加到MDR指示剂（组分A）中，并充分混合。
注意：20 µL MDR指示剂原液足以用于一块检测板。 未使用的储备液若试管密封良好，可分装后于 < -20°C 避光保存一个月。应避免反复冻融并防潮
工作溶液配制
MDR染料加载溶液：
将20 µL的MDR指示剂储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分C）中，并充分混合。
注意：MDR染料加载溶液足以用于一块检测板，在室温下至少可稳定保存 2 小时。
细胞样品制备
关于细胞样品制备的指南，请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
实验步骤
1.向细胞中加入测试化合物：对于 96 孔板，加入 10 µL 10X 化合物；对于 384 孔板，加入 5 µL 5X 化合物至化合物缓冲液（如 PBS 或 HHBS）中。对于空白孔（不含细胞的培养基），加入相应体积的化合物缓冲液。
注：加入化合物前无需洗涤细胞。但如果所测化合物对血清敏感，可在加入化合物前吸弃生长培养基和血清因子。吸弃后，向各孔中加入等体积的 HHBS（例如 96 孔板加 90 µL，384 孔板加 20 µL）。或者，细胞也可在无血清培养基中培养。
2.将细胞板在室温或 37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育至少 15 分钟或所需时长。
3.加入 MDR 染料加载液，96 孔板每孔 100 µL，384 孔板每孔 25 µL。
4.将加载染料的板在室温下避光孵育 1 小时。
注：适宜的孵育时间取决于所使用的具体细胞类型和细胞浓度。请根据每次实验进行优化。（我们获得的优化结果是孵育时间少于 4 小时。）
注：染料加载后请勿洗涤细胞。
注：对于非贴壁细胞，建议在孵育后关闭离心机制动，以 800 rpm 转速离心细胞板 2 分钟。
5.使用底部读数模式，在激发/发射波长 = 490/525 nm 下监测荧光强度。
