Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒
| Ex (nm) | 523 | Em (nm) | 551 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
钙流检测法是药物研发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Rhod-4 免洗钙检测试剂盒基于均相荧光检测原理，可高效检测细胞内钙离子动员现象。该试剂盒采用我们独有的Rhod-4 NW荧光染料。当细胞表达以钙离子为信号通路的GPCR时，可预先加载这种能自由穿透细胞膜的染料。Rhod-4是目前高通量筛选（HTS）中亮度最高的红色钙离子指示剂。进入细胞后，Rhod-4™的脂溶性封闭基团会被非特异性细胞酯酶水解，生成带负电荷的荧光染料并滞留于胞内，与钙离子结合后荧光强度显著增强。
在筛选化合物刺激下，受体信号通路会触发细胞内钙离子释放，从而使Rhod-4荧光信号大幅增强。该染料具有三大特性：长激发波长、高灵敏度，以及与钙离子结合后荧光强度提升250倍以上，这些优势使其成为检测细胞钙信号的理想工具。
Screen Quest Rhod-4 免洗钙检测试剂盒为GPCR和钙通道监测提供了优化解决方案，支持96孔板或384孔板操作，并能轻松实现自动化检测。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取/分液处理 |
| 其他可用仪器 | |
| ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux |
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞
2.除去生长培养基
3.添加Rhod-4 NW染料加载溶液（96孔板：100 µL /孔，384孔板：25 µL /孔）
4.室温下孵育1小时
5.Ex / Em = 540/590 nm下检测荧光强度
细胞制备
细胞样本制备指南请访问 ：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
储备溶液配制
注：所有未使用的储备液应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融
Rhod-4 NW储备溶液
向Rhod-4 NW（组分A）管中加入100 µL DMSO，混匀
注意：10 µL Rhod-4 NW储备液可满足一块板的用量
分析缓冲液（1X）
a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒）
将9 mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic® F127 Plus（1 mL，组分B）中，混匀
b）对于＃36332（100板试剂盒）
将90 mL HHBS（未提供）加入10X Pluronic® F127 Plus（10 mL，组分B）中，混匀
注意：10 mL 1X检测缓冲液可满足一块板的用量；未使用的1X检测缓冲液需分装保存于<-20°C，避光保存，避免反复冻融
工作溶液配制
Rhod-4 NW工资溶液
将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混匀。
注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.移除细胞板中的培养液
关键提示：移除培养液可降低背景荧光，并避免血清或培养基对化合物的干扰。若使用含1-5% FBS的培养基培养细胞，可跳过此步骤，但需使用HHBS缓冲液配制的2X染料加载溶液（针对0.5-1% FBS培养基用户，我们提供免洗钙检测试剂盒，货号#36334和#36335）*
2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。
3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。
注意：若实验需在37°C下进行，孵育后请立即检测；若细胞可耐受室温长时间处理，可延长室温孵育至1-2小时
4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。
