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Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒

英文名称:Spexyte™ Intracellular pH Calibration Buffer Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件在2-8度冷藏保存
产品概述

细胞内pH(pHi)在许多细胞事件中起着重要的调节作用,包括细胞体积调节,细胞代谢,钙调节,受体介导的信号转导,离子转运,内吞作用和其他细胞过程。胞浆中的细胞内pH通常为6.8〜7.4,酸性细胞器中的pH为4.5〜6.0。细胞内pH变化具有显着的生理学作用,例如,细胞内信使例如Ca 2+和cAMP的pH依赖性浓度影响细胞信号传导。最近的几篇报道表明,pH失调正在成为癌细胞的标志。 Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒提供了一系列带有尼日尔霉素的pH校准缓冲液(pH 4.5〜8.0),在100–150 mM K +的存在下,它们可通过外部pH调节细胞内pH。当与pH指示剂(例如BCFL,AM或BCECF,AM)结合使用时,Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒可创建用于确定细胞内pH的标准曲线。

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Texas Red/FITC 滤波片组
Em: Texas Red/FITC 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 440, 500 nm  
Em: 530 nm
Cutoff: 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.带有pH指示剂的染色细胞(例如:BCFL,AM)
2.用HH缓冲液洗涤细胞
3.准备细胞内pH校准缓冲液
4.向细胞添加细胞内pH校准缓冲液
5.在37°C孵育10分钟
6.使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞

 

溶液配制

1.储备溶液的制备

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Nigericin储备溶液(10 mM):
将276 µL DMSO(组分J)添加到小瓶尼日尔霉素(组分I)中,制成10 mM Nigericin储备溶液。

 

2.工作溶液的制备

将1 µL 10mM Nigericin储备溶液添加到1 mL标准pH缓冲液(组分A至组分H)中,制成细胞内pH校准缓冲液。

点击查看样品制备方案

 

样品示例及操作

这是使用BCFL,AM pH指示剂校准细胞内pH的样品实验方案。

1.用BCFL,AM染色细胞:

1.1在DMSO溶液中制备5 mM BCFL,AM(Cat#21190)。
1.2在HH缓冲液+ 0.02%PF127(Cat#20053)中稀释至5 µM。
1.3从细胞中去除生长培养基。
1.4加入100 µL BCFL,AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分钟。
1.6去除BCFL,AM染色溶液,并用HH Buffer洗涤一次。
1.7清空每个孔。

2.制作细胞内pH标准曲线:

2.1向细胞中添加100 µL细胞内pH校准缓冲液。
2.2在37°C下孵育5-10分钟。
2.3使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞。 例如:BCFL,AM:Ex = 440、500nm,Em = 530nm。

 

参考文献

PHD2 is a regulator for glycolytic reprogramming in macrophages
Authors: Annemarie Guentsch, Angelika Beneke, Lija Swain, Katja Farhat, Shunmugam Nagarajan, Ben Wielockx, Kaamini Raithatha, Jan Dudek, Peter Rehling, Anke Zieseniss
Journal: Molecular and Cellular Biology (2016): MCB--00236

Design, calibration and application of broad-range optical nanosensors for determining intracellular pH
Authors: R. V. Sondergaard
Journal: Nat Protoc (2014): 2841-58

Manipulation of intracellular pH by electroporation: an alternative method for fast calibration of pH in living cells
Authors: J. Vecer
Journal: Anal Biochem (2004): 348-50

Flow cytometric calibration of intracellular pH measurements in viable cells using mixtures of weak acids and bases
Authors: S. Chow
Journal: Cytometry (1996): 360-7

Calibration methods and avoidance of errors in measurement of intracellular pH (pHcyt) using the indicator bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein (BCECF) in human platelets
Authors: P. A. Valant
Journal: J Fluoresc (1992): 191-206

A novel method for absolute calibration of intracellular pH indicators
Authors: D. A. Eisner
Journal: Pflugers Arch (1989): 553-8

Intracellular calibration of a pH-sensitive dye in isolated, perfused salamander proximal tubules
Authors: J. R. Chaillet
Journal: J Gen Physiol (1985): 765-94

Umbelliferone as an Intracellular pH-sensitive fluorescent indicator and blood-brain barrier probe: instrumentation, calibration, and analysis
Authors: T. M. Sundt
Journal: J Neurophysiol (1980): 60-75