Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒

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适用范围

用于制作细胞内pH标准曲线 

 

产品介绍

细胞内pH值（pHi）作为关键的调控因子，在多种细胞活动中发挥重要作用，包括细胞体积调节、能量代谢、钙信号调控、受体介导的信号转导、离子转运、内吞作用等重要生理过程。通常情况下，细胞质pH维持在6.8-7.4范围，而酸性细胞器（如溶酶体）内pH则为4.5-6.0。细胞内pH的变化会产生显著生理效应，例如：通过影响Ca²⁺和cAMP等第二信使的浓度来调控细胞信号传导。最新研究表明，pH失调已成为肿瘤细胞的重要特征之一。

Spexyte™ 细胞内pH校准缓冲液试剂盒提供pH 4.5-8.0的系列校准缓冲液（含尼日利亚菌素），在100-150 mM K⁺存在条件下，可使细胞内pH值与外环境pH达到平衡。该试剂盒与BCFL AM或BCECF AM等pH荧光指示剂联用时，可建立标准曲线，从而实现细胞内pH值的精确测定。

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荧光酶标仪
Ex:	440, 500 nm
Em：	530 nm
Cutoff：	515 nm
推荐孔板:	黑色透明底板

样品实验方案

简要概述

1.使用pH指示剂（如BCFL,AM）染色细胞

2.用HH缓冲液洗涤细胞

3.配制细胞内pH校准缓冲液

4.向细胞中加入pH校准缓冲液

5.在37°C孵育10分钟

6.使用对应的Ex / Em滤光片分析细胞

重要提示：本试剂盒不包含HH缓冲液和pH指示剂

 

细胞样本制备

具体制备方法请参考：

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

溶液配制

储备溶液的制备

（注：所有未使用的母液应分装后-20℃保存，避免反复冻融）

Nigericin储备溶液（10 mM）

取276μL DMSO（组分J）加入Nigericin（组分I）小瓶，配制成10mM储备溶液。

 

工作溶液的制备

取1μL 10mM尼日利亚菌素母液加入1mL标准pH缓冲液（组分A-H），配制成细胞内pH校准缓冲液

 

标准试验方案

以下是使用BCFL，AM pH指示剂校准细胞内pH的样品实验方案。

BCFL，AM染色步骤

1.将BCFL, AM（货号#21190）配制成5 mM的DMSO溶液。

2.用HH缓冲液（含0.02% PF127，货号#20053）稀释至5 µM工作浓度。

3.吸除细胞培养液。

4.加入100 µL BCFL, AM染色工作液。

5.37°C孵育30分钟。

6.移除染色液，用HH缓冲液洗涤一次。

7.吸尽各孔液体。

 

pH标准曲线建立

1. 每孔加入100μL pH校准缓冲液

2. 37℃孵育5-10分钟

3. 使用相应滤光片分析（如BCFL,AM：Ex=440/500nm，Em=530nm）