磷酸二酯酶PDE IV底物 TAMRA-cAMP 红色荧光

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适用范围

用于测定PDE IV活性或筛选PDE IV抑制剂

产品介绍

这种红色荧光cAMP衍生物是磷酸二酯酶（PDE）IV的特异性底物。该底物可结合抗cAMP抗体，通过FRET检测或荧光偏振（FP）模式用于测定PDE IV活性或筛选PDE IV抑制剂。磷酸二酯酶是一类降解第二信使分子——环核苷酸cAMP和cGMP的酶家族，通过调控环核苷酸信号在亚细胞结构域中的定位、持续时间和振幅，成为这些第二信使分子介导的信号转导过程的重要调节因子。

凭借其独特的组织分布特征及结构与功能特性，PDE酶常成为药物抑制的靶点。PDE抑制剂通过抑制cAMP或cGMP的降解，能够延长或增强由这些第二信使介导的生理过程效应。目前PDE抑制剂已被确定为肺动脉高压、冠心病、痴呆、抑郁症和精神分裂症等领域的潜在治疗新药。

适用仪器

样品实验方案 

溶液制备 

储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融。

 TAMRA-cAMP PDE IV储备溶液（1 mM）：

将500 μ L DMSO加入0.5 μ mol TAMRA-cAMP PDE IV底物的小瓶中，制成1 mM的原液。注：未使用的原液可在-20℃阴暗处存放。

工作溶液

TAMRA-Cyclic-3’, 5’-AMP PDE IV工作液（2x）

将1 mM的TAMRA - 环化 - 3’,5’ - 单磷酸腺苷（cAMP）磷酸二酯酶IV（PDE IV）底物储备液稀释到PDE缓冲液（如10 mM Tris - HCl，pH 7.4，10 mM氯化镁（MgCl₂），1 mM氯化锰（MnCl₂））中，配制成200 - 400 nM的溶液，从而制备2倍浓度的TAMRA - 环化 - 3’,5’ - cAMP PDE IV底物检测溶液。注意：仅制备检测所需的足够量。 

样品操作及分析

1.将等体积的磷酸二酯酶IV（PDE IV）标准品或样品与2倍浓度的四甲基罗丹明（TAMRA）-环化3’,5’-腺苷一磷酸（AMP）磷酸二酯酶IV底物检测溶液混合，然后在室温下孵育至少1小时。

2.检测Ex/Em=540/590纳米处的荧光偏振。