ThiolTrace Violet 500*谷胱甘肽检测试剂*

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适用范围

谷胱甘肽检测

产品介绍

亚细胞水平上谷胱甘肽（GSH）的检测与定位对于理解氧化还原状态的调节、药物作用机制及解毒过程具有重要意义。ThiolTrace™ Violet 500是一种比常用探针mBBr、mBCl或Thiotracker™ Violet更明亮、更稳定的细胞内硫醇检测工具，可用于监测细胞内GSH水平。由于还原型谷胱甘肽占据细胞内大部分游离硫醇，该探针能有效评估细胞中还原型谷胱甘肽的含量。其亮度较mBCL及其他常用硫醇检测探针（如Thiotracker Violet）提升至少10倍，支持紫外或405 nm激发光源，并具有较大的斯托克斯位移。该产品兼容醛类固定剂和0.5% Triton® X-100透化处理，适用于多重检测分析（包括细胞毒性研究），为生物样本中还原型GSH的检测提供了一种简便、灵敏且重现性良好的方法。

ThiolTrace Violet 500与硫醇结合后，在405 nm紫激光激发下可发射520-530 nm的强荧光。与ThiolTracker Violet（Thermo Fisher Scientific）相比，在含生长因子的细胞培养基中，ThiolTrace Violet 500的荧光强度高出10-100倍，且能兼容多种稀释液（包括含血清细胞培养基）。该探针可广泛应用于流式细胞术、HCS成像及荧光显微镜检测领域

客户使用该产品检测并可视化细胞内谷胱甘肽（GSH）的水平变化，以验证CuDL@CM对GSH的消耗作用。具体来说，Thiol Tracker Violet通过荧光信号反映GSH的含量，其染色结果显示在Figure 4E和Figure 4F中：

①Figure 4E展示了不同处理组（如Cu²⁺、DQ、β-Lap、CuDL、CuDL@CM）的共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）图像，显示CuDL@CM组绿色荧光显著减弱，表明GSH被有效消耗。

②Figure 4F则显示了CuDL@CM在不同时间点处理后细胞内GSH水平的变化，进一步支持其剂量依赖性GSH耗竭效果。

文献发表在《ADVANCED HEALTHCARE MATERIALS》

文献名称：Carrier-Free Self-Assembled Nanoparticles for Triple-Amplified Tumor Chemodynamic Therapy and Cuproptosis Induction。

样品实验方案

简要概述

1.用5×10 ⁵到1×10 ⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

2.准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

3.在37 ^o C 孵育20至30分钟

4.在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度-Pacific Orange

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融。
ThiolTrace 紫罗兰色500储备液（500X）：
在小瓶ThiolTrace Violet 500中加入200 µL DMSO（未提供），并充分混合。 注意：分装并在-20℃下存储未使用的ThiolTrace Violet 500储备液。 避免反复冻融。

2.工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将1 µL ThiolTraceTM紫罗兰色500储备溶液加入您选择的0.5 mL缓冲液中，并充分混合。

注意：可以在不含有血清的细胞培养基中制备ThiolTrace Violet 500工作溶液。

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操作步骤

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用ThiolTrace 紫罗兰色工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL所选缓冲液（可选）洗涤细胞。

3.将细胞重悬于0.5 mL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液中，并在37oC培养箱中孵育20至30分钟。

注意：对于荧光显微镜，每孔添加200 µL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液。

4.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后在1 mL所选缓冲液（可选）中洗涤细胞。

5.重悬于缓冲液中，使用太平洋橙滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪监测荧光强度。

试剂应用文献