Amplite 荧光法丙二醛（MDA）定量试剂盒 选择性强

丙二醛（MDA）是脂质过氧化过程中的天然副产物之一。它被广泛用作确定氧化应激的可靠生物标志物，MDA的定量是评估病理生理过程中氧化应激的重要方法。Amplite®荧光丙二醛（MDA）定量试剂盒提供了一种测量MDA的新方法，无需基于TBARS的MDA测定所需的加热步骤。MDA绿色™ 可以与MDA反应，以方便的96孔或384孔微量滴定板形式产生显著增强的绿色荧光信号。与其他商业MDA检测试剂盒不同，该检测是稳定的，对MDA具有特异性，几乎没有其他醛的干扰。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法法丙二醛（MDA）定量试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	480nm
Em：	555nm
cutoff:	530nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1. 准备MDA标准品​​或测试样品（50 µL）
2. 添加MDA Green 工作溶液（50 µL）
3. 在室温下孵育6分钟
4. 添加MDA终止液（50 µL）
5. 检测Ex / Em = 480/555 nm的荧光强度

 

溶液制备

储备溶液

1. MDA标准溶液（100 mM）：将100µL ddH₂O加入MDA标准溶液（组分C）的样品瓶中，制成100 mM MDA标准溶液。

2. MDA Green 储备溶液（250 X）：将20µL DMSO（组分E）添加到一小瓶MDA Green （组分A）中，制成MDA Green 储备溶液。注意：制备后，所有储备溶液应储存在-20^oC下。避免重复冻融循环。

 

标准溶液

将10 µL 100 mM MDA标准溶液加到990 µL MDA分析缓冲液（组分B）中，以生成1000 µM MDA标准溶液（MDA7）。取1000 µM MDA标准溶液（MDA7）并进行1：3连续稀释，以得到带有MDA分析缓冲液（组分B）的系列稀释MDA标准溶液（MDA6- MDA1）。

 

工作溶液

MDA Green 工作溶液：将20µL 250 X MDA Green 储备溶液添加到5 mL MDA分析缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成MDA Green 工作溶液。 注意：该MDA Green 工作溶液应在实验前准备好，并避免光照。

 

样品分析

表1. 96孔透明底微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准品（MDA1-MDA7,6.25至400μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MDA1	MDA1	...	...
MDA2	MDA2	...	...
MDA3	MDA3
MDA4	MDA4
MDA5	MDA5
MDA6	MDA6
MDA7	MDA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
MDA1-MDA7	50ul	连续稀释（6.25至400μM）
BL	50ul	稀释缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样品

1. 根据表1和2中提供的布局，准备MDA标准品​​（MDA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。
   
   
2. 将50 µL MDA Green 工作溶液添加到MDA标准品​​，空白对照和测试样品的每个孔中。对于384孔板，请在每个孔中添加25 µL MDA Green™工作溶液。
   
   
3. 在避光条件下，于室温下孵育反应5-6分钟。
   
   
4. 向反应的每个孔中加入50 µL MDA终止溶液（组分D）。对于384孔板，向每个孔中添加25 µL MDA终止液（组分D）。
   
   
5. 使用荧光板读数器在Ex / Em = 480/555 nm（截止= 530 nm）处检测荧光强度。

 

参考文献

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