Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒

货号TJ35003存储条件 建议在低于-15℃温度下冷冻保存
规格30ml价格2750
Ex (nm)Em (nm)
分子量600.47溶剂Water
产品详细介绍


简要概述

        Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是百萤生物生产的一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(formazan)。WST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅;颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光探针。 


  CCK-8法 MTT法 MTS法 SRB法 XTT法 WST-1法
溶解性 水溶 难溶 水溶 水溶 水溶 水溶
检测波长 450nm 490nm 450nm 510nm 450nm 450nm
外观 液体 固体 液体 液体 固体 液体
是否需要重新溶解 不需要 需要 不需要 需溶于Tris碱 需要 不需要
便捷性 +++ ++ +++ + ++ +++
检测效率 ++++ + ++ + ++ ++
可重复性 +++ + ++ ++ + ++
稳定性 +++ + + +++ + ++

1.MTT法:MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。

2.MTS法:以生成有色化合物的显色反应为基础,比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。

3.SRB法:磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)比色法,主要用来检测细胞增殖情况。SRB是一种粉红色阴离子染料,易溶于水,在酸性条件下可特异性地与细胞内组成蛋白质的碱性氨基酸结合;在510 nm左右波长下产生吸收峰,吸光值与细胞量成线性正相关,故可用作细胞数的定量检测。

4.XTT法:XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物,可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物,当XTT与电子偶合剂共同使用时,甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

5.WST-1法:WST-1是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。WST-1是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。

 

活力计算:
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100

A(加药):具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

CCK-8实验中的关键点(供参考):1.种板数;2.种板后细胞的贴壁生长时间;3.加药后的孵育时间;4.CCK-8试剂加入量;5.CCK-8试剂加入后细胞孵育时间

 

 

产品特点

        本试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的 MTT 实验相比具有明显的优势:

 

1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2.与 MTT 方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。

3.本方法对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。

4.本方法所用试剂在培养基中比 MTT 更加稳定,实验结果重复性好。

5.MTT 具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。

6.本试剂盒在 4°C 避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。

 

        本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤药物的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有 WST-8 的 CCK-8 溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。



产品说明书

实验方案

1.在96 孔板中配置100μL的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在37°C,5%CO2的条件下)预培养24 小时。

2.向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测药物刺激。

3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。

4.每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

5.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。

7.如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

 

注意事项:

1.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

2.CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。

3.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

4.建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加样,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。

5.当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基),且培养时间长一些。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6.加入CCK -8溶液时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化。建议换用新鲜的培养基。

7.如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵敏度最高。

8.酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

9.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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品名 货号 规格
细胞增殖WST-8检测试剂 #15705/#15706/#15707 25mg/100mg/1g
Cell Meter 比色法WST-8细胞定量试剂盒 #22770/#22771 1000Tests/5000Tests

 

试剂应用文献

Authors: Lilei Peng,Yang Ming,Ling Zhang,Jie Zhou,Wei Xiang,Shan Zeng,HaiPing He,Ligang Chen
Journal:FASEB JOURNAL (2020)
 
Authors: Haiyan Song, Yuxiang Zhang
Journal:ScienceDirect:Neurochemistry International (2020)
 
Authors: Xiongdong Zhong, Xianchang Yu, Xiaoyan Wen, Lei Chen,Ni Gu
Journal:Cancer Cell International (2020)
 
Authors: Xiaoyong Wei, Xiaolong You, Jianlong Zhang, Cuncai Zhou
Journal:Molecular Therapy: Nucleic Acid (2019)
 
Authors: Haiyan Song, Yuxiang Zhang
Journal:BMC Cancer (2018)