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百萤课堂:如何确定荧光分子的亮度?

今天百萤为大家介绍一个非常实用的小技巧,用于确定荧光分子的亮度。如果你想选购一种荧光探针,而你已经确切的了解到了几种探针均可以满足你的实验要求,但是,哪一个才是荧光强度最好的呢?求人不如求己,实验还得靠自己!今天小萤告诉你之后,请收藏好它!


荧光分子的亮度取决于两个因素:

  1. 消光系数(ε):荧光分子吸收特定波长的光的强度。
  2. 荧光量子产率(Φ):吸收光转换为发射光的效率。

有小伙伴要问了,知道了消光系数和荧光量子产率又该怎么办呢?请记住以下公式:

亮度=消光系数(ε) x 荧光量子产率(Φ)

实例验证:大家对于PE、APC、Cy5应该都是比较熟悉的。

  • PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400
  • APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000
  • Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000

现在相信大家不用我说,也能看出哪个更亮了吧!那有小伙伴又要问了,可是荧光探针那么多,我找不到确切的消光系数和荧光量子产量啊!别着急,下面是百萤总结好的常用的产品消光系数和荧光量子产率请收好!

产品名称 消光系数(ε)cm-1M-1 荧光量子产率(Φ) 备注
iFluor 350 20000 0.95 在水性缓冲液中(pH=7.2)
iFluor 405 37000 0.91
iFluor 430 40000 0.78
iFluor 450 40000 0.82
iFluor 488 75000 0.9
iFluor 514 80000 0.83
iFluor 532 90000 0.68
iFluor 546 100000 0.67
iFluor 555 100000 0.64
iFluor 560 120000 0.57
iFluor 568 100000 0.57
iFluor 594 180000 0.53
iFluor 610 110000 0.85
iFluor 633 250000 0.29
iFluor 647 250000 0.25
iFluor 660 250000 0.26
iFluor 670 250000 0.63
iFluor 680 220000 0.23
iFluor 700 220000 0.23
iFluor 750 275000 0.12
iFluor 790 250000 0.13
iFluor 800 250000 0.11
iFluor 810 250000 0.05
iFluor 820 250000 N/D
iFluor 840 200000 0.02 在PBS中

 

产品名称 消光系数(ε)cm-1M-1 荧光量子产率(Φ) 备注
Alexa Fluor 488 73000 0.92 缓冲液(pH=7.2)
Alexa Fluor 532 81000 0.61
Alexa Fluor 546 112000 0.1
Alexa Fluor 568 88000 0.69
Alexa Fluor 594 92000 0.66
Alexa Fluor 647 270000 0.33
Alexa Fluor 660 132000 0.37
Alexa Fluor 680 183000 0.36
Alexa Fluor 700 205000 0.25
Alexa Fluor 750 290000 0.12

 

产品名称 消光系数(ε)cm-1M-1 荧光量子产率(Φ) 备注
Cy3 150000 0.04  
Cy3B 120000 0.58  
Cy3B酸 120000 0.58  
Cy5 250000 0.27(PBS)/0.4(乙醇)  
Fluo-4 82000 0.16  
Fluo-8 23430 0.16  
Cal-590 78000 0.62  
7-AAD 27500 0.02 在双链DNA结合的情况下
AFC 17000 0.53 在乙醇中
Hoechst 33258 46000 0.034  
SYTO 17 88000 0.964  
SYTOX绿色 67000 0.53 在DNA中
JOJO-1 171000  0.44 在DNA中

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