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荧光素酶(Luciferases)

 

萤火虫荧光素酶

最通用和最常见的报告基因是北美萤火虫 photinus pyralis 的荧光素酶。 该蛋白质不需要酶活性的翻译后修饰。 它在高浓度下(体内)无毒,可用于原核或真核细胞。

Amlite 荧光素酶报告基因检测

Amlite 荧光素酶报告基因检测试剂盒使用专有的无 DTT 配方来量化活细胞和细胞提取物中的荧光素酶活性。 该检测基于萤火虫荧光素酶,这是一种单体 61 kD 酶,可催化荧光素的两步氧化,产生 560 nm 的光。 该试剂盒中提供的配方会产生一种发光产品,该产品在与荧光素酶相互作用时会发出强光。 试剂盒包括所有成分,以及与 HTS 液体处理仪器兼容的优化“混合和读取”分析协议。 它们具有高灵敏度,可用于需要低检测限的分析。该试剂盒具有用于研究基因调控和功能的快速、简单和均质的生物发光检测。 该检测与标准细胞生长培养基的使用兼容。

图1. 在带有 NOVOstar 读板器 (BMG Labtech) 的白色 96 孔板中,使用Amlite 荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶剂量反应。 该试剂盒可检测低至 0.1pg/孔的萤光素酶,孵育 20 分钟至 5 小时而不会损失信号强度。

表1. Amlite 荧光素酶报告基因检测试剂盒相关产品

产品名称 规格 货号
Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒 1 plate 12518
Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒 10 plates 12519
Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒 100 plates 12520

 

高斯荧光素酶

近年来,其他荧光素酶(例如 Gaussia 荧光素酶)的使用有所增加,因为这些报告基因较小且不需要 ATP 的存在。 Gaussia 萤光素酶是一种 20 kD 的蛋白质,通过氧气催化腔肠素氧化以产生光。

Amlite 高斯荧光素酶报告基因检测

Amlite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒使用专有的发光配方来量化细胞培养基中的荧光素酶活性。 该配方产生发光产物,在与 高斯荧光素酶相互作用时发出强光。 该试剂盒提供与 HTS 液体处理仪器兼容的所有成分。 它们具有高灵敏度,可以在方便的 96 孔和 384 孔板中进行。

图2. 使用Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒(蓝线)和市售的 高斯荧光素酶试剂盒(红线)在白色 96 孔板下的结果对比图

 

表2. Amlite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒的产品信息

产品名称 规格 货号
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 1 plate 12530
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 10 plates 12531
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 100 plates 12532

 

海肾荧光素酶

海肾荧光素酶是一种从海三色堇 (Renilla reniformis) 中分离出来的 36 kDa 蛋白质。 与萤火虫萤光素酶相比,海肾萤光素酶的底物和辅因子要求不同。 海肾荧光素酶在有氧的情况下使用腔肠素产生 480 nm 的蓝光。 与萤火虫萤光素酶一样,海肾萤光素酶由于底物要求和光输出的差异,可用于双报告基因检测。

Amlite 海肾荧光素酶报告基因检测

Amlite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的方法,可使用专有的发光配方在基于细胞的检测中检测海肾荧光素酶活性。与海肾荧光素酶相互作用后,该配方产生具有强发光的产品。该检测与标准细胞生长培养基兼容。该试剂盒能够检测野生型和合成 hRluc 基因的初级表达或基因表达。 可以在方便的 96 孔和 384 孔板中进行操作。

图3. 在带有 NOVOstar 酶标仪 (BMG Labtech) 的白色 96 孔板中,使用Amlite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒检测海肾荧光素酶。

表3. Amlite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒产品信息

产品名称 规格 货号
Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 1 plate 12535
Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 10 plates 12536
Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 100 plates 12537

表4. 荧光素酶特异性、辅因子要求和物理特性

生物 荧光素酶 kDa 基质 需要 分泌
Photinus pyralis 北美萤火虫荧光素酶 61 D-荧光素 Mg, ATP No
Luciola cruciata 日本萤火虫 (Genji-botaru) 荧光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Luciola italica 意大利萤火虫萤光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Luciola lateralis 日本萤火虫(Heike)萤光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Luciola mingrelica 东欧萤火虫荧光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Photuris pennsylvanica 宾夕法尼亚萤火虫荧光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Pyrophorus plagiophthalamus 点击甲虫荧光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Phrixothrix hirtus 铁路蠕虫荧光素酶 64 D-荧光素 Mg, ATP No
Renilla reniformis 海肾荧光素酶 36 腔肠素 N/A No
Rluc8(海肾荧光素酶突变体) 36 腔肠素 N/A No
绿海肾荧光素酶 36 腔肠素 N/A No
Gaussia princeps 高斯荧光素酶 20 腔肠素 N/A Yes
Gaussia-Dura 荧光素酶 20 腔肠素 N/A Yes
Cypridina noctiluca 海萤荧光素酶 62 Vargulin/Cypridinaluciferin N/A Yes
Cypridina hilgendorfii Cypridina (Vargula) 荧光素酶 62 Vargulin/Cypridinaluciferin N/A Yes
Metridia longa 萤光素酶 23.8 腔肠素 N/A Yes
Oplophorus gracilorostris OLuc 19 腔肠素 N/A Yes

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