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激酶(Kinases)

 

激酶是一类酶,可催化磷酸部分从高能、提供磷酸盐的分子(如 ATP)转移到其特定底物。 该过程称为磷酸化,其中高能 ATP 分子向底物提供磷酸基团,产生磷酸化底物和 ADP(图 1)。 由于磷酸酐键断裂期间释放的高能量水平,激酶是稳定该反应所必需的。

图 1. 蛋白激酶反应方案

 

激酶是较大的磷酸转移酶家族的一部分,根据它们作用的底物将其分类,例如蛋白激酶、脂质激酶或碳水化合物激酶。 分子的磷酸化状态会影响其活性、反应性以及与其他分子结合的能力。 激酶在各种细胞通路中尤为突出,包括代谢、细胞信号传导、蛋白质调节和细胞转运,这使它们成为开发新型治疗药物候选物或激酶抑制剂的药物发现中最重要的目标类别之一。

 

蛋白激酶

蛋白激酶在细胞活化过程中起关键作用。 通过向底物蛋白添加磷酸基团,蛋白激酶引导许多蛋白质的活性、定位和功能,并用于调节重要细胞过程的活性。 它们构成了最大和功能最多样化的基因家族之一,已在人类中鉴定出超过 500 种不同的激酶。

人类蛋白激酶的类型:

  1. AGC 激酶:包含 PKA、PKC 和 PKG。
    CaM 激酶:包含钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶。
    CK1:包含酪蛋白激酶 1 组。
    CMGC:包含 CDK、MAPK、GSK3 和 CLK 激酶。
    STE:包含酵母 Sterile 7、Sterile 11 和 Sterile 20 激酶的同源物。
    TK:含有酪氨酸激酶。
    TKL:包含酪氨酸激酶样激酶组。
 

大多数市售的蛋白激酶检测试剂盒用于检测磷酸肽的形成或 ATP 消耗。 然而,大多数基于磷酸肽形成的检测依赖于抗体或对肽底物有特殊要求,而 ATP 消耗检测可能会由于各种生物化合物对荧光素酶的抑制或激活而遇到一系列干扰。我们的 ATP 和 ADP 检测试剂盒不使用抗体或特殊底物,生物化合物的干扰最小,可用于检测激酶活性。

Amlite 通用荧光激酶检测

Amlite 通用荧光激酶检测试剂盒(货号31001)是一种方便的非放射性和免洗涤均相检测试剂盒,用于测量激酶活性。 该试剂盒利用酶偶联反应监测 ADP 的形成,ADP 与磷酸转移酶活性成正比。

图 2. 使用 Gemini 荧光酶标仪(Molecular Devices)在黑色384 孔板中使用Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒检测 ADP 剂量反应。

 

肠激酶

肠激酶(也称为肠肽酶)是一种由十二指肠壁细胞产生的丝氨酸蛋白酶。 作为人类和其他动物消化系统中的关键酶,肠激酶将胰蛋白酶原(胰腺分泌的一种非活性物质)转化为其活性形式的胰蛋白酶。胰蛋白酶催化肽键的水解,将蛋白质分解成更小的肽。 这些肽产物随后通过其他蛋白酶水解成氨基酸,促进它们被吸收到血流中。 最近的研究表明,肠激酶活性的抑制可能通过抑制参与致癌和转移的蛋白酶而产生抗肿瘤作用。 因此,肠激酶的高选择性和灵敏检测在生化应用中起着关键作用。

Amlite 比色肠激酶活性检测

Amlite 比色肠激酶活性检测试剂盒(货号11410)提供了一种用于定量肠激酶活性的灵敏检测方法。 肠激酶裂解后,肠激酶底物可以通过 EK Yellow 使用吸光度酶标仪在 405 nm 处检测。 使用 Amlite 比色肠激酶活性检测试剂盒,可以在 100 µl 反应体积中检测低至 3 ng/mL 的肠激酶。

图2. 使用 SpectraMax 酶标仪 (Molecular Devices) 在 96 孔透明微孔板中使用 Amplite比色肠激酶活性测定试剂盒检测肠激酶剂量反应。


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