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肽和寡核苷酸标记(AAT)

用于标记肽和寡核苷酸的荧光染料

染料标记的肽和寡核苷酸是生化和细胞研究中的重要工具。荧光肽和寡核苷酸已广泛用于荧光显微镜,荧光偏振光谱,时间分辨荧光(TRF)和荧光共振能量转移(FRET)等。FRET肽和寡核苷酸广泛用于基于分子信标和其他技术的传染病诊断,它已通过体内或体外荧光相关细胞分选(FACS)用于细胞分析研究和诊断。它的最重要特征是高灵敏度和非放射性检测。

染料和肽/寡核苷酸之间的连接是共价键,在大多数生物学条件下稳定且不会破坏。在某些情况下,在染料和肽/寡核苷酸之间引入功能性接头以最小化肽/寡核苷酸生物活性的改变。对于所有的肽/寡核苷酸标记,染料都必须连接在确定的位置。通常,优选的荧光标记应具有高荧光量子产率并保留未标记生物分子的生物活性。AAT Bioquest提供了多种荧光标记染料,可促进染料与用于生物学研究的肽/寡核苷酸的结合。这些荧光染料包括香豆素,荧光素,罗丹明和花青。其中,我们的Tide Fluor™,California Red™,SunRed™和Helix Fluor™染料经过优化,可用于标记肽和寡核苷酸。


用于标记肽和寡核苷酸的非荧光染料

FRET是一种物理现象,如今已越来越多地用于生物医学研究和药物发现中。FRET是能量从供体分子到受体分子的无辐射传输。供体分子是最初吸收能量的染料或生色团,而受体是随后转移能量的生色团。这种共振相互作用发生在大于原子间的距离上,没有转化为热能,也没有任何分子碰撞。能量的转移导致供体的荧光强度和激发态寿命的减少,以及受体的发射强度的增加。以发生FRET的方式相互作用的一对分子通常称为供体/受体对。

尽管有许多因素影响FRET,但要使FRET发生需要满足的主要条件相对较少。供体和受体分子必须彼此接近(通常为10-100Å)。受体的吸收或激发光谱必须与供体的荧光发射光谱重叠。它们重叠的程度称为光谱重叠积分(J)。供体和受体过渡偶极子的方向必须近似平行。假设供体受体对是相容的,发生FRET所必需的最关键元素是该对之间的紧密接近。福斯特(Förster)证明了过程(E)的效率取决于施主与受主之间的第六次幂逆距离,如以下等式:

E = R o 6 /(R o 6 + r 6

其中Ro是传递能量的一半的Förster距离,r是施主与受主之间的实际距离。R o的大小取决于施主和受主的光谱性质。Förster距离范围从20到90Å对生物大分子的研究最为有用。

蛋白酶的检测和特定蛋白酶抑制剂的筛选对于发现用于治疗和管理蛋白酶相关疾病的潜在药物至关重要。各种供体和受体分子(荧光的或非荧光的)附着在肽(寡核苷酸)/蛋白质上(形成内部淬灭的结合物),并根据氨基酸序列用于检测蛋白酶。精心选择供体和受体分子,使受体的吸收与供体的荧光重叠,从而确保荧光通过共振能量转移而猝灭。底物的酶水解导致供体和受体分子的空间分离。

DABCYL染料对于制备FRET肽/寡核苷酸相当有用。AAT Bioquest提供了多种DABCYL衍生物用于开发FRET肽/寡核苷酸底物。但是,DABCYL对于较长波长的荧光染料(如罗丹明和花青)不是有效的淬灭剂。我们建议您尝试使用为制备FRET肽/寡核苷酸而优化的Tide Quencher™染料,以获得卓越的效果。

尽管DABCYL已被用于开发各种FRET应用,但对于较长波长的染料(例如荧光素,罗丹明和花青)的低淬灭效率限制了其在敏感的荧光FRET探针开发中的应用。另外,由于DABCYL的吸收光谱对环境敏感,AAT Bioquest已开发出耐用的Tide Quencher™受体染料,用于开发更长波长的FRET探针。Tide Quencher™染料是消除经典淬灭剂限制的绝佳选择。


Tide Quencher染料的主要优点:

  • TQ染料使您能够探索其他淬灭剂无法实现的FRET电位。
  • 多种反应形式便于自我构建所需的FRET生物分子。
  • 与您所需的荧光供体完全匹配。
  • 低价格与高性能共存。

表1.普通染料的Tide Flour染料当量

如果您正在使用 尝试使用Tide Fluor™染料
AlexaFluor®350,AMCA,DyLight™350 TF1 [Tide Fluor™1]
AlexaFluor®488,Cy2®,FITC,DyLight™488 TF2 [Tide Fluor™2]
AlexaFluor®555,Cy3®,DyLight™550,TRITC TF3 [Tide Fluor™3]  
TF3WS [Tide Fluor™3WS]
AlexaFluor®594,DyLight™594,TexasRed® TF4 [Tide Fluor™4]  
AlxeaFluor®647,Cy5®,DyLight™650  TF5WS [Tide Fluor™5WS]
AlexaFluor®680,Cy5.5®,IRDye®700,DyLight™680 TF6WS [Tide Fluor™6WS]  
AlexaFluor®750,Cy7®,DyLight™750 TF7WS [Tide Fluor™7WS] 
AlexaFluor®790,DyLight™800,IRDye®800 TF8WS [Tide Fluor™8WS] 

表2.普通染料的Tide Quencher染料当量

如果您正在使用 尝试使用Tide Fluor™染料
DABCYL,BHQ®-0,QSY®35 TQ1 [Tide Quencher™1]
BHQ®-1,QXL™520,QSY®35 TQ2 [Tide Quencher™2]
BHQ®-2 TQ3 [Tide Quencher™3]
BHQ®-3,QSY®7,QSY®9 TQ4 [Tide Quencher™4]
QSY®21 TQ5 [Tide Quencher™5]
IRDye®QC-1 TQ6 [Tide Quencher™6]
IRDye®QC-1 TQ7 [Tide Quencher™7]