5-FAM-YVAD-FMK

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产品介绍

FAM-YVAD-FMK，即5-羧基荧光素-酪氨酸-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-氟甲基酮，可不可逆地结合 stimulated cells（经刺激的细胞）中的活性半胱天冬酶-1（caspase-1）。FAM-YVAD-FMK 信号产生的荧光强度与活性caspase-1的含量成正比，并能通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光微孔板检测仪轻松进行检测。

样品操作及分析

以下说明书仅提供指导，实际实验请根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规胱天蛋白酶测定方案

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪检测荧光或使用酶标仪检测吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1：250的比例将250X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。