Amplite 比色法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒

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产品优势

1.灵敏度高

2.在100μL反应体系中，可检测低至4μM的β-HB浓度

适用范围

用于β-羟基丁酸检测

产品介绍

酮体是肝脏合成的代谢产物，在血糖水平降低时可作为外周组织的替代能源。血液中主要的酮体包括β-羟基丁酸（β-HB）和乙酰乙酸（AcAc），丙酮则为第三类常见酮体。正常生理状态下（如空腹或长时间运动时），血液中仅存在少量酮体；而在糖尿病患者以及酒精/水杨酸中毒、激素缺乏、儿童低血糖等急性病症中，血液酮体水平会显著升高。酮体过度积累（酮症）可引发病理性代谢性酸中毒（酮症酸中毒），严重时可危及生命。由于β-羟基丁酸占血液酮体总量的约75%，定量检测β-HB水平已成为诊断和监测酮症酸中毒的重要指标。

Amplite 比色法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒为生物样本中的β-HB水平检测提供了高灵敏度解决方案。该检测基于β-HB的酶偶联反应原理：通过特异性NADH传感分子检测反应生成的NADH，利用酶标仪在570nm/610nm双波长下测定吸光度比值（OD ratio）。该试剂盒在100μL反应体系中，可检测低至4μM的β-HB浓度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备β-HB工作溶液（50 µL）
2.添加β-HB标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.OD比为570/610 nm时监测吸光度的增加

溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H2O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。

1.2 β-HB标准溶液（100 mM）：
将1 mL H2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液（组分D）中，制成100 mMβ-HB标准溶液。

2.标准溶液

β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液，以生成1000 µMβ-HB标准溶液（HB7）。 取1000 µMβ-HB标准溶液（HB7），并在PBS中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的β-HB标准溶液（HB6-HB1）。 注意：稀释的β-HB标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

3.2 将50 µL 100X NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成β-HB工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此β-HB工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准（HB1-HB7，1至1000 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备β-HB标准液（HB），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.用吸光度板读数器以OD比570/610 nm监测吸光度的增加。