Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒

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适用范围

用于β-内酰胺酶活性检测

 

产品介绍

β-内酰胺酶是一类能够水解β-内酰胺环的水解酶大家族。β-内酰胺环作为青霉素衍生物、头孢菌素、单环β-内酰胺类和碳青霉烯类等所有β-内酰胺类抗生素的共同结构特征，其水解开环将导致抗生素抗菌活性丧失。随着临床及非临床环境中细菌通过合成β-内酰胺酶对β-内酰胺类抗生素产生日益严重的耐药性，常需联合使用克拉维酸等β-内酰胺酶抑制剂以克服耐药问题。因此，β-内酰胺酶活性检测对于评估β-内酰胺类抗生素效价及预防抗生素耐药性具有核心意义。

AAT Bioquest公司推出的比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒提供了一种高灵敏度的生物样本检测方案。该检测采用显色底物Nitrocefin，当其被β-内酰胺酶水解时，颜色会由黄色变为红色。通过酶标仪测定490 nm与380 nm波长处的吸光度比值（OD490/OD380），即可准确测定β-内酰胺酶活性。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收：	490/380 nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板实验示例

概述

准备β-内酰胺酶测定混合物（50μL）

加入β-内酰胺酶标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30-60分钟

在OD比率为490 / 380nm时监测吸光度增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方案

1.制备β-内酰胺酶标准储备液：

将100μLddH2O加入到β-内酰胺酶标准品（组分C）的小瓶中以制备50mU /mLβ-内酰胺酶标准储备溶液。

注意：未使用的β-内酰胺酶标准储备液应分成一次性等分试样并储存在-20oC。

 

2.准备β-内酰胺酶标准品的连续稀释液：

2.1将10μLβ-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL，步骤1）加入990 L 1×PBS缓冲液中，生成500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液。

注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应及时使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液，在PBS中进行1：2连续稀释，得到约250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀释的β-内酰胺酶标准品。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将含有β-内酰胺酶标准品和含β-内酰胺酶的测试样品的系列稀释液加入到96孔透明底部微量培养板中。

 

3.准备β-内酰胺酶测定混合物：

将50μL硝基呋喃储备溶液（组分A）加入5mL组分B中，充分混合，制成β-内酰胺酶测定混合物（组分A + B）。

注意：这种β-内酰胺酶测定混合物足以用于一个96孔板。 β-内酰胺酶测定混合物不稳定，每次使用都要新鲜。

 

4.运行β-内酰胺酶测定：

4.1将50μLβ-内酰胺酶测定混合物（来自步骤3）添加到β-内酰胺酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLβ-内酰胺酶测定混合物。

4.2在室温下孵育反应30-60分钟，避光。

4.3使用吸光度读板仪检测OD比为490/380 nm时的吸光度增加。