Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒

产品货期

咨询

 

产品优势

在100 µL反应体系中可检测低至4μM的D-乳酸

 

适用范围

用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等生物样品中的乳酸检测

 

产品介绍

乳酸是一种手性分子，具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中，丙酮酸通过乳酸脱氢酶（LDH）的作用持续转化为乳酸。监测乳酸水平是评估组织氧供需平衡的有效手段，对研究细胞和动物生理功能具有重要意义。哺乳动物无法代谢D-乳酸，其清除主要依赖肾脏排泄。

D-乳酸和L-乳酸广泛存在于酸奶、奶酪等发酵乳制品，以及腌制蔬菜、熏制肉鱼等食品中。由细菌代谢产生的D/L-乳酸含量可作为鸡蛋、牛奶、果汁及葡萄酒等食品的质量指标。血液中D-乳酸异常升高通常反映胃肠道细菌过度繁殖。

AAT Bioquest品牌Amplite®荧光法乳酸检测试剂盒（L-乳酸检测货号13814和13815，D-乳酸检测货号13810和13811）提供荧光法和比色法两种检测方案，适用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等生物样品中的乳酸检测。该酶偶联反应中，乳酸浓度与NADH含量成正比，后者通过特异性显色NADH传感器进行检测。为提高检测灵敏度，建议使用酶标仪在~A575nm/A605nm吸光度比值下读取信号。经测试，该比色法Amplite® D-乳酸检测试剂盒在100μL反应体系中最低检测限可达4μM。

 

适用仪器

---

光吸收酶标仪
吸收:	575/605nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板测定示例

概述

制备D-乳酸测定混合物（50μL）

加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

 

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。

 

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。