Amplite 比色法D-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒

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产品优势

在100 µL反应体系中可检测低至3 mU/mL的D-乳酸脱氢酶

适用范围

用于乳酸脱氢酶（LDH）检测

产品介绍

乳酸脱氢酶（LDH）是一种氧化还原酶，能够催化丙酮酸与乳酸的相互转化。该酶广泛存在于动物、植物等多种生物体的细胞质中。当组织损伤或红细胞发生溶血时，细胞会将LDH释放入血液。由于LDH具有较高的稳定性，该酶被广泛用于评估组织和细胞的损伤及毒性程度。LDH定量检测在医学领域应用广泛，某些病理状态（如恶性肿瘤）也会导致LDH水平升高。

Amplite 比色法D-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒采用吸光度法，可用于检测血清、血浆、尿液及细胞培养样本等生物样品中的D-乳酸脱氢酶（D-LDH）。在该酶偶联反应中，LDH活性与NADH浓度成正比，后者通过特异性显色NADH传感器进行监测。本检测方法对D-LDH具有特异性，可使用酶标仪在~570 nm与~605 nm吸光度比值（A575 nm/A605 nm）下读取信号。

该比色法Amplite® D-乳酸脱氢酶检测试剂盒在100 µL反应体系中可检测低至3 mU/mL的D-乳酸脱氢酶。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备D-乳酸脱氢酶工作溶液（50 µL）
2.加入D-乳酸脱氢酶标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测在A575nm / A605nm处的吸光度比增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H2O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。

1.2 D-LDH标准溶液（100 U / mL）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到D-LDH标准溶液（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL D-LDH标准溶液。

2.标准溶液

D-LDH标准
将10 µL 100X D-LDH标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL D-LDH标准溶液。 取1000 mU / mL D-LDH标准溶液，并在PBS中进行1：3的系列稀释，以得到D-LDH标准品（SD7-SD1）的系列稀释液。 注意：稀释的D-LDH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将10 mL测定缓冲液（组分B）添加到瓶中的酶探针（组分A）中，制成酶探针混合物。

注意：此酶探针混合物足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。 或者，可以通过将200 µL H2O加入组分A的瓶子中制成50倍的D-LDH酶混合储备液，然后通过将储备液与测定缓冲液（组分B）混合并制备D-LDH工作溶液。 按比例的100倍NAD解决方案。

3.2 将50 µL 100X NAD储备溶液添加到5 mL酶探针混合物中，并充分混合以制成D-LDH工作溶液。 注意：此D-LDH工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定-足以进行一个实验并立即使用。

样品操作及实验分析

表1.白色/透明底部96孔微孔板中D-LDH标准品和测试样品的布局。 SD = D-LDH标准品（SD1-SDH7，0.3至300 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备D-LDH标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL D-LDH工作溶液添加到D-LDH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使D-LDH测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL D-LDH工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用酶标仪在A575nm / A605nm处监测吸光度的增加。