Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒

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产品优势

在100μL反应体系中可实现低至1μM的G6P检测。

 

适用范围

用于葡萄糖-6-磷酸（G6P）检测

 

产品介绍

葡萄糖-6-磷酸（G6P）作为葡萄糖进入细胞的关键代谢中间体，既可在肝脏和肌肉中转化为糖原储存，又能通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）反应生成NADPH还原当量。这一代谢途径在红细胞中尤为重要——G6PD缺陷会直接导致溶血性贫血。

AAT Bioquest品牌Amplite®比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒，为血清、血浆、尿液及细胞培养物等生物样本中的G6P检测提供了简便、灵敏且快速的解决方案。该检测基于酶偶联反应原理，G6P浓度与通过显色型NADPH传感器测定的NADPH生成量呈正相关，检测时采用575nm与605nm双波长吸光度比值法读取信号。实验证实，该试剂盒在100μL反应体系中可实现低至1μM的G6P检测灵敏度。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	575/605nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板测定示例

概述

制备G6P测定混合物（50μL）

加入G6P标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻试剂盒组分

 

操作方法

1.准备NADP储备溶液（100X）：

向小瓶中加入100μLH2O（组分C）以制备100X NADP储备溶液。

 

2.准备G6P原液：

将100μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到G6P标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM G6P标准溶液。

注意：未使用的G6P标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在冰箱中。

 

3.准备G6P标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将10μLG6P储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM G6P标准溶液。 然后将10μL的1mM G6P储备溶液加入990L 1x PBS缓冲液中以产生100μMG6P标准溶液。

注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1 mM G6P标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的G6P标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将G6P标准品和含有G6P的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

 

4.准备G6P分析混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAP原液（100X，步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种G6P测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行G6P检测：

5.1将50μLG6P测定混合物（来自步骤4.2）加入G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3使用吸光度板读数器在A575nm / A605nm处检测吸光度比率的增加。