Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）检测试剂盒

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产品优势

在100μL反应体系中可实现低至3mU/mL的G6PD检测灵敏度。

适用范围

用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）检测

产品介绍

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）作为磷酸戊糖途径的限速酶，催化葡萄糖-6-磷酸转化为6-磷酸葡萄糖酸-δ-内酯。这一关键代谢途径通过维持辅酶NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）水平，不仅为红细胞等细胞提供还原力，还参与戊糖的生物合成。NADPH的产生对肝脏、乳腺、脂肪组织及肾上腺等需要大量合成脂肪酸和类异戊二烯的组织尤为重要，其通过维持细胞内谷胱甘肽水平，有效保护红细胞免受氧化损伤。G6PD缺陷会导致非免疫性溶血性贫血的发病风险显著升高。

AAT Bioquest品牌Amplite®比色法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测试剂盒，为血清、血浆、尿液及细胞培养物等生物样本中的G6PD检测提供了简便、灵敏且快速的解决方案。该检测根据酶偶联反应原理，G6PD活性与通过显色型NADPH传感器测定的NADPH浓度呈正相关，检测时采用575nm与605nm双波长吸光度比值法进行读数。实际测试表明，该试剂盒在100μL反应体系中可实现低至3mU/mL的G6PD检测灵敏度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备G6PD工作溶液（50 µL）
2.添加G6PD标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测在A575nm / A605nm处的吸光度比增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H₂O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6PD标准溶液（100 U / mL）：
将100 µL H2O或1X PBS缓冲液加到G6PD Standard（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL G6PD标准溶液。

2.标准溶液

G6PD标准
将10 µL 100 U / mL G6PD标准溶液添加到990 µL 1x PBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL G6PD标准溶液。 取1000 mU / mL G6PD标准溶液，并在1x PBS缓冲液中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的G6PD标准液（G6PD7-G6PD1）。

注意：稀释的G6PD标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。

3.2 将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6PD工作溶液。

注意：此G6PD工作溶液足以用于一个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用。 避免暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1. G6PD标准品和测试样品在白色透明底部96孔微孔板中的布局。 G6PD = D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标准品（G6PD1-G6PD7，0.4至300 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备G6PD标准品（G6PD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向G6PD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6PD工作溶液，以使G6PD测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6PD工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用酶标仪在A575nm / A605nm处监测吸光度的增加。