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Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒

英文名称:Amplite® Colorimetric Glycerol 3-Phosphate (G3P) Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒,甘油3-磷酸(G3P)是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物,和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite G3P分析试剂盒提供了量化G3P灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P的浓度,其与酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示,它可在100μL检测体积内检测到12.5μMG3P。检测方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化而无需分离步骤。 使用吸光度酶标仪可以在〜576 +/- 5 nm处轻松读取信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 575nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.制备3-磷酸甘油工作溶液(50 µL)
2.加入3-磷酸甘油标准液或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm OD处的吸光度增加

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液(200X):
将50 µL DMSO(组分E)添加到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中,制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 G3P标准溶液(10 mM):
将250 µL ddH2O加到G3P标准品(组分D)的小瓶中,制成10 mM G3P标准品溶液。

 

2.标准溶液配制

G3P标准
将100 µL 10 mM G3P标准储备液添加到900 µL 1X PBS缓冲液中,以生成1000 µM G3P标准溶液。 将200 µL的1000 µM G3P标准溶液加入800 µL的1X PBS缓冲液中,以生成200 µM的G3P标准溶液(CS7),然后进行1:2的系列稀释,以得到其余的G3P标准液(CS6-CS1)。 注意:稀释的G3P标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液(组分C)添加到瓶酶混合液(组分B)中,并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液(200X)加入同一瓶酶混合液(组分B)中,制成G3P工作溶液(终瓶应包含组分A,B和C)。 注意:应立即使用G3P工作溶液,并远离光线。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中的G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准(CS1-CS7,6.25至200 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
CS1 CS1 ... ...
CS2 CS2 ... ...
CS3 CS3    
CS4 CS4    
CS5 CS5    
CS6 CS5    
CS7 CS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
CS1-CS7 50ul 连续稀释(6.25至200 µM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,将G3P标准品(CS),空白对照(BL)和测试样品(TS)制备到96孔透明底部/黑色壁微孔板中。对于384孔板,请使用 每孔25 µL试剂,而不是50 µL。 注意:根据需要处理细胞或组织。

2.在G3P标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液,以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL G3P工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下,将反应在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm(或570 nm / 610 nm的比率)处监控吸光度的增加。

 

参考文献

CCAAT/enhancer binding protein-beta negatively regulates the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1 in pig PK-15 cells
Authors: Gao Y, Pan Y.
Journal: J Appl Genet (2011): 451

Interaction of fosfomycin with the glycerol 3-phosphate transporter of Escherichia coli
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Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 1323

Rickettsia prowazekii uses an sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase and a novel dihydroxyacetone phosphate transport system to supply triose phosphate for phospholipid biosynthesis
Authors: Frohlich KM, Roberts RA, Housley NA, Audia JP.
Journal: J Bacteriol (2010): 4281

Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
Authors: Wydysh EA, Medghalchi SM, Vadlamudi A, Townsend CA.
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Effects of salinity changes on the growth of Dunaliella salina and its isozyme activities of glycerol-3-phosphate dehydrogenase
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Journal: J Agric Food Chem (2009): 6178

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Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
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CTP:glycerol 3-phosphate cytidylyltransferase (TarD) from Staphylococcus aureus catalyzes the cytidylyl transfer via an ordered Bi-Bi reaction mechanism with micromolar K(m) values
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Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 196

Stimulation of rat liver mitochondrial sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase by polymyxin B via enhanced extraction of lysophosphatidic acid
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Purification and characterization of cytosolic glycerol-3-phosphate dehydrogenase from skeletal muscle of jerboa (Jaculus orientalis)
Authors: Berrada W, Naya A, Iddar A, Bourhim N.
Journal: Mol Cell Biochem (2002): 117

 

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