Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒

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产品优势

1."即混即读"模式，兼容高通量筛选平台

2.在100 µL反应体系中可检测低至12.5 µM的G3P

适用范围

用于甘油-3-磷酸检测

产品介绍

甘油-3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间产物。动物、真菌和植物都利用G3P来生成ATP。在脑细胞和骨骼肌细胞中，G3P被用于再生NAD+。该物质已被证实与肥胖等脂质代谢失衡疾病密切相关。

Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒采用Amplite® Red荧光底物定量检测G3P，其信号强度与酶偶联反应循环中生成的过氧化氢浓度成正比。试剂盒采用优化的"即混即读"检测模式，兼容高通量筛选（HTS）平台。在100 µL反应体系中可检测低至12.5 µM的G3P。检测过程支持96孔板或384孔板微孔板形式，无需分离步骤，可轻松适配自动化操作系统。使用酶标仪在576±5 nm波长处即可直接读取吸光度信号。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.制备3-磷酸甘油工作溶液（50 µL）
2.加入3-磷酸甘油标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm OD处的吸光度增加

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 G3P标准溶液（10 mM）：
将250 µL ddH₂O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。

2.标准溶液配制

G3P标准
将100 µL 10 mM G3P标准储备液添加到900 µL 1X PBS缓冲液中，以生成1000 µM G3P标准溶液。 将200 µL的1000 µM G3P标准溶液加入800 µL的1X PBS缓冲液中，以生成200 µM的G3P标准溶液（CS7），然后进行1：2的系列稀释，以得到其余的G3P标准液（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液（200X）加入同一瓶酶混合液（组分B）中，制成G3P工作溶液（终瓶应包含组分A，B和C）。 注意：应立即使用G3P工作溶液，并远离光线。

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中的G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，6.25至200 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底部/黑色壁微孔板中。对于384孔板，请使用 每孔25 µL试剂，而不是50 µL。 注意：根据需要处理细胞或组织。

2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G3P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm（或570 nm / 610 nm的比率）处监控吸光度的增加。