Amplite 比色法甘油（丙三醇）检测试剂盒

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产品优势

1.灵敏度高

2.在100μL反应体系中，可检测低至0.15μg/mL（约1.6μM）的甘油浓度。

适用范围

用于甘油检测

产品介绍

甘油作为肝脏和脂肪组织中甘油三酯及磷脂合成的重要前体，在禁食状态下，储存的甘油三酯可被水解生成游离甘油和脂肪酸。释放至血液中的游离甘油含量与甘油三酯/脂肪酸循环速率成正比，这一过程对代谢调节和产热具有重要作用。

Amplite 比色法甘油（丙三醇）检测试剂盒为生物样本中的甘油水平检测提供了高灵敏度解决方案。该检测基于甘油的酶偶联反应原理：通过级联反应生成过氧化氢，并采用Amplite® Red HRP底物在HRP偶联反应中进行检测，利用酶标仪在575nm波长处测定吸光度值。该试剂盒在100μL反应体系中，可检测低至0.15μg/mL（约1.6μM）的甘油浓度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备甘油工作溶液（50 µL）
2.加入甘油标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm的OD

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite HRP底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite HRP底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备溶液。

1.2 甘油标准溶液：
将1 mL ddH2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶甘油标准品（组分D）中，制成1 mg / mL甘油标准液。

2.标准溶液

甘油标准
将10 µL甘油标准储备溶液（1 mg / mL）加入990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成10 µg / mL标准溶液（G7）。 然后进行1：2的系列稀释，以获得系列稀释的甘油标准品（G6-G1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一瓶酶混合物（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite HRP底物原液添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此甘油工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。 注意：可以将未使用的B + C组分分成一次性使用的等分试样，并保存在-20°C下。

样品操作及实验分析

表1.透明底部96孔微孔板中甘油标准品和测试样品的布局。 G =甘油标准品（G1-G7，0.156至10 µg / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备甘油标准品（G），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在甘油标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL甘油工作溶液，以使总甘油测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，应在每个孔中添加25 µL甘油工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，并在575 nm的OD处进行路径检查。