Amplite 比色法L-丙氨酸检测试剂盒

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产品优势

灵敏度高

适用范围

用于L-丙氨酸检测

产品介绍

L-丙氨酸（L-Ala）作为重要蛋白质的基本组成单元，在生物体内发挥着关键作用。其主要由肌细胞通过乳酸合成，经肝脏吸收进入血液循环，并在谷丙转氨酶催化下转化为丙酮酸进入核心代谢通路。L-丙氨酸不仅对葡萄糖生成和血糖调控至关重要，还在免疫系统功能和肾结石预防中起重要作用。L-丙氨酸水平不足通常是营养不良、低蛋白饮食或应激状态的标志。

AAT Bioquest品牌Amplite®比色法L-丙氨酸检测试剂盒为生物样本中的L-丙氨酸定量提供了高灵敏度比色检测方案。该试剂盒基于酶偶联反应原理，通过级联反应释放过氧化氢，并采用Quest Fluor™ L-丙氨酸传感分子，在575nm波长处通过酶标仪进行吸光度检测。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
2.添加L-丙氨酸标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.检测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸探针（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸标准溶液（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸标准溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7）。取100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7），并在PBS中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的L-丙氨酸标准溶液（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix2和25 uL的200X L-丙氨酸探针储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中，并充分混合以制成L-丙氨酸工作溶液。 注意：L-丙氨酸工作溶液不稳定-请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.563至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应液在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。