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Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒

英文名称:Amplite® Colorimetric L-Lactate Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒,乳酸是手性的并且具有两种光学异构体:L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中,乳酸盐通过乳酸脱氢酶(LDH)不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法,在研究细胞和动物生理学时非常有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢,其从体内主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中,例如酸奶和奶酪,以及腌制蔬菜,腌制肉类和鱼类。D-和L-乳酸含量是食品的质量指标,如鸡蛋,牛奶,果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒(L#乳酸检测Cat#13814和13815,D-lactate检测Cat#13810和13811)提供荧光和吸光度检测方法,用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。生物样品,如血清,血浆,尿液,以及细胞培养样品。在酶偶联测定中,乳酸与NADH成比例相关,其通过生色NADH传感器特异性监测。通过吸光度酶标仪在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号,以提高测定灵敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸测定试剂盒,我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的L-乳酸。它应用广泛,可以很容易地适用于需要测量L-乳酸的各种应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒。

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 575/605nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

96孔板测定示例

概述

制备L-乳酸测定混合物(50μL)

加入L-乳酸标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液(100X):

向NAD小瓶(组分C)中加入100μLH2O,制成100×NAD储备溶液。

 

2.准备L-乳酸盐储备液:

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入L-乳酸盐标准品(组分D)的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意:未使用的L-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备L-乳酸标准品(0至1 mM)的连续稀释液:

3.1将10μLL-乳酸盐储备液(来自步骤2)加入990L PBS缓冲液中,以产生1mM L-乳酸盐标准溶液。

注意:稀释的L-乳酸标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸标准溶液进行1:3连续稀释,得到L-Lactate标准品的300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述,将L-乳酸盐标准品和含L-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

 

4.制备L-乳酸测定混合物:

4.1将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶探针(组分A)中。

4.2将50μLNAD储备溶液(100X,来自步骤1)加入到组分A的瓶子中(来自步骤4.1),并充分混合。

注意:这种L-乳酸盐测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的L-乳酸盐测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行L-乳酸测定:

5.1将50μLL-乳酸盐测定混合物(来自步骤4.2)添加至L-乳酸盐标准品,空白对照和测试样品(参见步骤3.3)的每个孔中以使得总L-乳酸盐测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μLL-乳酸盐测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时,避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

 

参考文献

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