Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒

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产品优势

灵敏度高

 

适用范围

用于草酰乙酸检测

 

产品介绍

草酰乙酸是三羧酸循环的关键组分，在该循环中它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸。该物质还参与糖异生、尿素循环、乙醛酸循环、氨基酸合成及脂肪酸合成等多种代谢途径。草酰乙酸缺乏会限制糖异生和尿素循环功能，并可能导致能量生成减少。此外，草酰乙酸可作为血液谷氨酸清除剂，在创伤性脑损伤后通过减少海马区神经元损失和改善神经功能预后发挥神经保护作用。

Amplite®比色法草酰乙酸检测试剂盒为生物样本中的草酰乙酸定量提供了高灵敏度检测方案。其检测原理是通过酶偶联反应将草酰乙酸转化为丙酮酸并生成过氧化氢，随后利用Amplite® Red显色体系，在575 nm波长处通过酶标仪检测过氧化氢的生成量。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	575nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板测定示例

概述

准备测试样品（50μL）和连续稀释的草酰乙酸标准品（50μL）

加入等体积的测定混合物（50μL）

在室温下孵育30分钟至1小时

监测575nm处的吸光度强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品：

1.1将100μLDdH₂O加入到草酰乙酸盐标准小瓶（组分E）中以制备100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液：将10μL100mM草酰乙酸盐（来自步骤1.1）加入990μL测定缓冲液（组分C）中，得到1mM草酰乙酸溶液。 将320μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入680μL测定缓冲液中以制备320μM草酰乙酸溶液。 进行1：2连续稀释，得到160,80,40,20,10,5μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1，将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸标准品加入透明底96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物：

2.1Make Amplite 红色底物原液（200X）：将50μLDMSO（组分F）加入Amplite Red底物（组分A）中，制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶（OAC）储备溶液（100X）：将50μLddH₂O加入草酰乙酸脱羧酶（组分D）中以制备100×草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物：将5mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合瓶（组分B）中充分混合。 将50μLOAC储备溶液（来自步骤2.2）和25μL200XAmplite Red储备溶液（来自步骤2.1）转移到瓶中并充分混合。

注意1：分析混合物不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。

注意2：将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃，避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定：

3.1将50μL测定混合物（来自步骤2.3）添加到草酰乙酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.3），以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μLAssay混合液。

注意2：在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用575 nm的吸光度读板仪检测吸光度的增加。