Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒

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产品优势

灵敏度高

适用范围

用于丙酮酸检测

产品介绍

丙酮酸是细胞内代谢途径中的关键化合物，源自葡萄糖代谢（糖酵解过程）。每分子葡萄糖可分解为两分子丙酮酸，并通过以下两种途径为细胞供能：在氧气充足条件下（有氧呼吸），丙酮酸经丙酮酸脱氢酶转化为乙酰辅酶A，进入三羧酸循环（又称Krebs循环）产生ATP；在缺氧环境下，丙酮酸则通过无氧代谢途径分解——动物细胞中生成乳酸，植物和微生物中则产生乙醇。丙酮酸水平异常或乳酸/丙酮酸浓度比值变化可能与肝脏疾病或代谢紊乱相关，因此成为临床诊断和实验室研究的重要指标。

AAT Bioquest品牌Amplite®比色法丙酮酸检测试剂盒提供了一种高灵敏度的丙酮酸定量方案。该检测基于酶偶联反应原理：丙酮酸通过级联反应释放过氧化氢，随后通过特异性丙酮酸传感分子在575nm波长处进行吸光度检测（使用酶标仪）。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备样品以及连续稀释的丙酮酸标准溶液（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

2.标准溶液

丙酮酸标准
将2μL100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙酮酸盐标准溶液（PS7）。 然后执行1：2的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中丙酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1- PS7，3.125至200 µM），BL =空白对照（PBS），TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备丙酮酸标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行丙酮酸测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。