Amplite 比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒

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产品优势

支持96孔或384孔微孔板检测模式，操作便捷高效

 

适用范围

用于超氧化物歧化酶（SOD）检测

 

产品介绍

超氧化物歧化酶（SOD）是一类能够催化超氧化物歧化为氧气和过氧化氢的酶。作为细胞内主要的活性氧物种之一，超氧化物与神经退行性疾病、缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化及衰老等多种病理过程密切相关。在几乎所有暴露于超氧化物自由基的细胞中，SOD都发挥着关键的抗氧化防御作用。研究表明，SOD1基因缺失的小鼠会出现广泛病理表型，包括肝细胞癌变、年龄相关性肌萎缩加速、白内障早发以及寿命缩短等现象；而SOD的过表达则可保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡，并促进细胞分化。

Amplite®比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒为溶液中的SOD活性检测提供了快速灵敏的解决方案。其检测原理为：黄嘌呤氧化酶（XO）催化黄嘌呤转化为超氧自由基离子、尿酸和过氧化氢，生成的超氧自由基与ReadiView™ SOD560反应产生560 nm处具有特征吸收的产物。SOD通过清除超氧自由基抑制该反应，导致560 nm处吸光度降低，其降低程度与SOD活性呈正相关。本试剂盒支持96孔或384孔微孔板检测模式，操作便捷高效。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	560nm
推荐孔板:	透明孔板

检测示例

概述

准备SOD标准品或测试样品（50 µL）

加入SOD工作液1（25 µL）

加入SOD工作液2（25 µL）

室温孵育30-60分钟

于560 nm波长下监测吸光度

 

溶液配制

原液配制

除非另有说明，所有未使用的储备溶液在制备后应分装成单次使用的等分试样，并在-20°C下储存。避免反复冻融。

SOD标准溶液（10 kU/mL）

向SOD标准品（组分D）瓶中加入50 µL assay buffer（组分E），配制成10 kU/mL标准溶液。

 

标准品梯度稀释方案

推荐使用在线稀释计算工具：
https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11305

SOD标准曲线制备

取10 µL 10 kU/mL SOD标准溶液加入990 µL assay buffer（组分E），得到100 U/mL标准溶液（SD7）。

将100 U/mL标准溶液（SD7）按1:10用assay buffer（组分E）稀释，获得10 U/mL标准溶液（SD6）。

取10 U/mL标准溶液（SD6）进行1:3连续稀释（用assay buffer），得到梯度浓度标准品（SD5-SD1，0.041-100 U/mL）。

 

工作液配制

SOD工作液1

向ReadiViewTM SOD560（组分A）瓶中加入2.5 mL assay buffer（组分E）混匀，再加入50 μL 50X黄嘌呤溶液（组分B）。

注：需现用现配，避光保存。该工作液不稳定，剩余溶液应弃用。

SOD工作液2

向黄嘌呤氧化酶（组分C）瓶中加入50 μL assay buffer（组分E）混匀，取50 μL此溶液加入2.5 mL assay buffer（组分E）。

 

96孔板实验方案

表1. 透明底96孔板布局（SD=标准品；BL=空白对照；TS=测试样品）

BL	BL	阳性对照	细胞内容物
STD 1	STD 1	...	...
STD 2	STD 2	...	...
STD 3	STD 3
STD 4	STD 4
STD 5	STD 5
STD 6	STD 6
STD 7	STD 7

 

表2. 每个孔的试剂组成。

孔	体积	试剂
STD1-STD7	50 µL	连续稀释 (0.041 to 100 U/mL)
BL	50 µL	Assay Buffer (Component E)
TS	50 µL	测试样品

1.按表1和表2所示布局配制超氧化物歧化酶（SOD）标准品（SD）、空白对照（BL）及待测样本（TS）。384孔板每孔需加注25 µL试剂（替代常规50 µL用量）。

2.向SOD标准品、空白对照及待测样本各孔中分别加入25 µL SOD工作液1，使总反应体积达75 µL/孔。若使用384孔板，则每孔改为加入12.5 µL SOD工作液1，总反应体积调整为37.5 µL/孔。

3.继续向上述各孔中加入25 µL SOD工作液2，总反应体积升至100 µL/孔。384孔板操作时，每孔改为加入12.5 µL SOD工作液2，总反应体积为50 µL/孔。

4.将反应体系于室温避光条件下孵育30至60分钟。

5.使用酶标仪在550至560 nm波长处监测吸光度值。