Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒 增强灵敏度

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适用范围

用于超氧化物歧化酶（SOD）检测

产品介绍

超氧化物歧化酶（SOD）是一类能够催化超氧化物歧化为氧气和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞内主要的活性氧物种之一，与神经退行性疾病、缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化及衰老等病理过程密切相关。SOD是几乎所有暴露于超氧化物自由基的细胞中重要的抗氧化防御系统。事实上，缺乏SOD1的小鼠会出现多种病理症状，包括肝细胞癌、年龄相关性肌肉质量流失加速、白内障提前发生以及寿命缩短。而过表达SOD则能保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡，并促进细胞分化。

Amplite®比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的SOD活性检测方法。已知NADH和SOD酶系统可产生超氧化物自由基，将WST-1还原为黄色甲臜染料，其最大吸收峰在440 nm附近。SOD通过催化超氧阴离子歧化为过氧化氢和氧气来抑制WST-1的还原，从而降低甲臜产物在440 nm处的吸光度。440 nm吸光度的降低程度与SOD活性成正比。该试剂盒可采用便捷的96孔或384孔微孔板形式进行检测。

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加SOD标准品或测试样品（50μL）
2.添加SOD工作溶液1（25μL）
3.添加SOD工作溶液2（25μL）
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1SOD标准溶液（10 kU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。

2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分E）中，得到100 U / mL SOD标准溶液（SD1）。 取100 U / mL SOD标准溶液（SD1），在分析缓冲液（组分E）中进行1:10，得到10U / mL SOD标准溶液（SD2）。 取10 U / mL标准溶液（SD2）并进行1：3连续稀释，以获得使用分析缓冲液（组分E）的连续稀释的SOD标准品（SD3-SD7）。

3.工作溶液配制

3.1 SOD工作溶液方案1：
将2.5mL测定缓冲液（组分E）加入WST-1瓶（组分A）中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液（组分B）加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意：该SOD工作溶液1应在实验前制备，并避光。 SOD工作溶液1不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.2 SOD工作溶液方案2：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到NADH小瓶（组分C）中并充分混合。 然后，将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD工作溶液2。

操作步骤

表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。

SD = SOD标准品（SD1  -  SD7,100至0.041 U / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1，使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1，总体积为37.5μL/孔。

3.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2，总体积为50μL/孔。

4.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。